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中华根瘤菌(Sinorhizobium)是一类好氧异养型革兰氏阴性细菌，能够与豆科植物共生固氮，是土壤中常见的一类菌群。目前，国内外对中华根瘤菌的研究主要集中在与植物共生的关系、制作根瘤菌剂、提高固氮效率和环境修复方面，也有报道发现某些菌株能够产生VB12。
本实验室分离获得一株能够产生VB12的菌株，通过16SrDNA测序鉴定，该菌株属中华根瘤菌属（S．sp．），是一个全新的菌株，命名为kd23。培养过程中发现，该菌除了产生VB12之外，细胞还有大量聚羟基丁酸(PHB)积累。PHB颗粒在发酵前期大量积累，后期部分分解，与VB12的合成似乎存在一定联系。因此，研究二者的内在联系，有重要的理论价值。我们推测，阻断PHB的合成，细胞积累3-羟基丁酰辅酶A，可能有效提高VB12的合成产量。
利用常规发酵条件调查和工艺优化方法初步研究了菌株kd23的生长和VB12发酵过程。确定其发酵最适碳源为麦芽糖；氮源为玉米浆和甜菜碱；糖浓度维持在20g/L有利于提高VB12的产量；钴离子在发酵过程中有决定性的作用。优化后的发酵周期，192h，VB12的产量达到120mg/L。
利用分子生物学方法和基因操作技术克隆了PHB合成过程中关键酶—PHB合成酶基因phbC。通过常规PCR和不均—PCR，得到了1859bp的phbC基因片段，与苜蓿中华根瘤菌(S．melilotiRm41)一致性84%。
应用分子生物学技术构建了含有phbC基因同源臂和氯霉素抗性基因的整合载体pPHBCAT质粒，为失活中华根瘤菌phbC基因提供了材料。
关于该菌株的分子生物学研究尚未见报道，为研究PHB颗粒与VB12之间的关系，我们建立了S．sp．kd23遗传转化系统。通过抗生素敏感性验证实验，确定10μg/L氯霉素可以用于S．sp．kd23的筛选。应用含phbC上下游同源臂和氯霉素抗性基因的PCR产物进行电击转化，结果表明，在25μF，200Ω，2.2kV，2mm电转杯的条件下，得到了13个克隆子。PCR鉴定结果表明，我们获得了phbC基因沉默的转化子。
本实验室分离获得一株能够产生VB12的菌株，通过16SrDNA测序鉴定，该菌株属中华根瘤菌属（S．sp．），是一个全新的菌株，命名为kd23。培养过程中发现，该菌除了产生VB12之外，细胞还有大量聚羟基丁酸(PHB)积累。PHB颗粒在发酵前期大量积累，后期部分分解，与VB12的合成似乎存在一定联系。因此，研究二者的内在联系，有重要的理论价值。我们推测，阻断PHB的合成，细胞积累3-羟基丁酰辅酶A，可能有效提高VB12的合成产量。
利用常规发酵条件调查和工艺优化方法初步研究了菌株kd23的生长和VB12发酵过程。确定其发酵最适碳源为麦芽糖；氮源为玉米浆和甜菜碱；糖浓度维持在20g/L有利于提高VB12的产量；钴离子在发酵过程中有决定性的作用。优化后的发酵周期，192h，VB12的产量达到120mg/L。
利用分子生物学方法和基因操作技术克隆了PHB合成过程中关键酶—PHB合成酶基因phbC。通过常规PCR和不均—PCR，得到了1859bp的phbC基因片段，与苜蓿中华根瘤菌(S．melilotiRm41)一致性84%。
应用分子生物学技术构建了含有phbC基因同源臂和氯霉素抗性基因的整合载体pPHBCAT质粒，为失活中华根瘤菌phbC基因提供了材料。
关于该菌株的分子生物学研究尚未见报道，为研究PHB颗粒与VB12之间的关系，我们建立了S．sp．kd23遗传转化系统。通过抗生素敏感性验证实验，确定10μg/L氯霉素可以用于S．sp．kd23的筛选。应用含phbC上下游同源臂和氯霉素抗性基因的PCR产物进行电击转化，结果表明，在25μF，200Ω，2.2kV，2mm电转杯的条件下，得到了13个克隆子。PCR鉴定结果表明，我们获得了phbC基因沉默的转化子。