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目的:研究二烯丙基二硫(DADS)、自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)以及两者联合对人白血病HL-60细胞的增殖抑制及凋亡的影响,探讨自噬在人白血病HL-60细胞中发挥的作用,为DADS优化治疗白血病提供理论基础。方法:1.采用CCK-8法检测RAPA、DADS以及DADS联合RAPA对HL-60细胞增殖抑制的影响。2.免疫荧光法检测DADS联合RAPA处理HL-60细胞后自噬标志性蛋白LC3的表达情况。3.Western Blot检测RAPA、DADS以及DADS联合RAPA处理HL-60细胞后自噬蛋白LC3B、P62的表达情况。4.Annexin V-PI双染结合流式细胞术检测RAPA、DADS以及DADS联合RAPA对HL-60细胞凋亡的影响。结果:1.CCK-8检测RAPA、DADS以及DADS联合RAPA对人白血病HL-60细胞增殖抑制的影响。结果显示:RAPA不同浓度组0、20、40、80、160、320、640nM处理HL-60细胞48h后,各组的抑制率为0、25.68±2.94%、26.33±3.10%、26.95±1.33%、27.68±2.78%、30.93±3.25%、32.68±2.98%,各实验组的抑制率均高于空白组(P<0.05),并随RAPA浓度的上升呈轻微的梯度增加。DADS不同浓度组5、10、20、40、60μM处理HL-60细胞48h后,各组的抑制率为2.51±3.24%、18.96±5.68%、29.52±0.65%、45.25±3.23%、51.93±3.51%,与溶媒组(0.07±3.69%)相比,5μM DADS对HL-60细胞增殖抑制作用不显著(P>0.05),10、20、40、60μM DADS可以抑制HL-60细胞的增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性。RAPA、DADS、DADS联合RAPA组处理HL-60细胞48h后,各组的抑制率为25.19±1.89%、51.98±2.70%、61.61±1.08%,与空白组相比(P<0.05),各实验组的抑制率均上升,而且DADS联合RAPA组对HL-60细胞增殖抑制作用最显著。结果提示,RAPA能够增强DADS对HL-60细胞的增殖抑制作用。2.免疫荧光检测DADS联合RAPA处理HL-60细胞24h后,自噬蛋白LC3的表达,结果显示:与对照组相比,实验组中出现红色的高亮泡状LC3。提示,DADS联合RAPA可以诱导HL-60细胞发生自噬。Western blot检测DADS、RAPA、DADS联合RAPA组处理HL-60细胞4h后LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ蛋白的表达,结果显示:与对照组相比(P<0.05),各实验组中LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ的比值均明显上升,其中DADS联合RAPA组LC3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ的比值上升最显著。而在DADS联合RAPA处理HL-60细胞2h、6h实验组中,与对照组相比(P<0.05),6h组的LC3BⅡ、LC3B-Ⅰ比值明显上升。同时,采用Western blot检测RAPA、DADS以及DADS联合RAPA处理HL-60细胞24h后对P62蛋白的影响,结果显示:与未处理组相比(P<0.05),各实验组中p62蛋白表达水平均降低,其中DADS联合RAPA组蛋白表达最低。结果提示:RAPA能够增强DADS诱导的人白血病HL-60细胞自噬,且自噬过程是通畅的。3.流式细胞术检测不同浓度RAPA处理HL-60细胞48h后各组细胞的凋亡率,结果显示:各实验组凋亡率的差异无显著性意义(P>0.05)。而运用DADS、DADS联合RAPA处理HL-60细胞48h后,与RAPA处理组相比(P<0.05),两组凋亡率明显上升,其中DADS联合RAPA组的凋亡率最显著。提示,雷帕霉素能够增加DADS对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞凋亡,从而可能提高DADS治疗白血病的效果。结论:雷帕霉素增强DADS对人白血病HL-60细胞增殖抑制作用,其机制与诱导自噬性细胞死亡和凋亡有关。