作为目前所知唯一一种活性受Ca2+/钙调素(Calmodulin,CaM)调节的Ser/Thr蛋白磷酸酶,钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)在免疫调节、学习记忆和细胞信号转导等方面起着极其重要的作用,并且与老年性痴呆症、心肌肥大、风湿性关节炎等众多疾病的发生有关。　　 在实验室前期工作的基础上,我们确定了金银花的提取液对CN有一定的激活作用。我们利用实验室建立起来的药物筛选模型来跟踪活性成分,经过粉碎、渗漏、萃取、硅胶柱层析、高速逆流层析等步骤,分离纯化出活性单体化合物。经过UV、IR、NMS、MS结构鉴定确证该化合物为绿原酸。　　 为了阐明绿原酸对CN的激活机制,我们主要利用酶学、荧光光谱学以及计算机辅助分子模拟的的方法对绿原酸激活CN的机制进行了深入研究。研究发现,无论测活体系有无Mn2+或Ni2+存在,绿原酸对CN均有显著的激活,同时这种激活作用是CaM依赖型的。在无Mn2+或Ni2+时,对CN的激活效率达到5-7倍,有Mn2+或Ni2+存在时达到130％。通过荧光光谱学手段,我们发现绿原酸与CN间可以结合形成复合物,并且这种结合引起了CN的构象改变,CN活性中心周围环境极性增强,这也就说明活性中心更加暴露于溶剂环境中。酶促反应动力学结果证明,绿原酸的结合没有改变CN与底物间的亲和力,只是提高了催化反应速率,这同时也暗示着绿原酸的结合部位不在活性中心。为了研究在Mn2+或Ni2+存在时绿原酸对CN的激活机制,我们采用了表观动力学研究方法,发现绿原酸的加入可以提高CN与这两种激活金属离子间的亲和力,从而进一步协同激活CN。对CN有抑制作用的Zn2+存在时,绿原酸同样可以激活CN,并且这种激活是通过绿原酸螯合结合在非活性中心的Zn2+而实现的。在研究绿原酸对CNA及其系列突变体的作用时,我们发现绿原酸可以以相同的作用方式激活CNA和CNAabc,而对CNAab和CNAa没有激活。我们构建了色氨酸三点置换突变体利用荧光光谱方法和计算机辅助分子模拟的手段,计算并模拟出了绿原酸在CN上的结合位点,发现该位点不在活性催化中心和自抑制区,而位于CN催化亚基上的CaM结合区,而这种结合并不影响CaM与CN间的结合。　　 综上所述,绿原酸通过结合在CN的CaM结合区,对CN构象进行调节激活CN,并且这种激活作用是CaM依赖型的。绿原酸还可以与Ni2+和Mn2+协同作用激活CN,逆转Zn2+对CN的抑制。本文为CN激活剂的激活机制提供了新的思路,也为今后更深入的开展绿原酸在体内对CN作用机制的研究奠定了基础。