论文部分内容阅读
青花菜茎叶是青花菜(Brassicaoleracea var.italica)成熟花球采摘后的农业副产品,往往占整个青花菜总量的60%-70%。我国每年都会产生大量的青花菜茎叶农业副产物,但大部分青花菜茎叶往往是直接废弃掉,其利用程度极低。因此,本文就对其生物活性物质和生物活性进行研究,以期为更好的利用青花菜茎叶提供一定的方向和理论参考。首先,本文选取了浙江省内常见的四个品种(’炎秀’、’阳光’、’耐寒优秀’、’绿雄’)的青花菜茎叶,对其总酚、总黄酮、粗多糖、维生素C、粗蛋白、粗脂肪、矿质元素和抗氧化活性进行了测定,多方面评价其营养和保健功效。结果表明,不同品种茎叶的活性成分和抗氧化活性有一定的差异;其中’耐寒优秀’茎叶具有最高的粗多糖含量,’炎秀’茎叶具有最高的总多酚含量,因此选取二者为后续研究对象。以’炎秀’茎叶为实验材料,对其70%乙醇提取物和其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇的萃取相的进行了总多酚和总黄酮的测定,同时研究了这些组分的抗氧化活性,包括对DPPH自由基、ABTS+自由基的清除和还原能力;以及对α-糖苷酶、酪氨酸酶的抑制活性。结果表明,以上组分都具有一定的抗氧化活性,其中乙酸乙酯相的抗氧化活性最强。另外,乙酸乙酯相也表现的较强的α-糖苷酶和酪氨酸酶抑制活性和最高的总酚、总黄酮含量。通过硅胶柱层析对乙酸乙酯相进行分离纯化,得到了一个化合物为胆固醇。对胆固醇进行生物活性测试,发现其具有较好的α-糖苷酶抑制活性。以’耐寒优秀’茎叶为实验材料,通过Plackett-Burman和响应面实验设计优化提取青花菜茎叶多糖(PBB)。首先,通过Plackett-Burman实验设计,料液比、提取时间、提取温度被确定为对多糖提取率有显著影响的主要因素。其次,上述三因素、三水平的Box-Behnken因素设计和多元二次项模型来优化提取青花菜茎叶多糖。最后,用优化的提取条件来验证实际最大提取率。结果表明,提取温度为82℃,提取时间为212 min,料液比为26 mL/g为获得最大多糖提取率的最优条件。在最优条件下,其理论最大提取率为16.64%,与实际最大提取率(16.59±0.04)%无显著差异;因此,该实验设计模型能较好的用于青花菜茎叶多糖的提取优化。上述青花菜茎叶多糖经除蛋白和大孔树脂脱色后(PBB-1),用DEAE Fast Flow阴离子柱进行分离纯化,得到PBB-1a、PBB-1b、PBB-1c、PBB-1d四个多糖亚组分。由于PBB-1a和PBB-1c产量较高,则进一步研究了其化学成分,包括糖、蛋白、糖醛酸、硫酸基团、总酚,同时对其红外吸收光谱特征也进行了表征。另外,也对其体外抗氧化和体外降血糖的生物活性进行了研究。结果显示,测试多糖组分均具有一定的抗氧化和降血糖活性,其中PBB-1c在这两个活性指标中均表现了最好的活性。对PBB-1c进行Sephadex G-100凝胶柱层析得到了一个相对均一的多糖PBB-1c-1。对PBB-1c-1进行MTT试验测试其对HepG2癌细胞的抑制效果,并用荧光显微镜观察其对HepG2细胞的形态影响。结果提示PBB-1c-1具有一定的一定抑制HepG2细胞的活性,在形态学上的表现为诱导HepG2细胞的凋亡。