论文部分内容阅读
KLF家族(kruppel-like factors)是真核生物中广泛存在的一类基础转录元件结合蛋白(BTEP)，通过羧基端三个连续锌指构成的保守结构域结合靶基因启动子内富含GC序列以调控其转录，进而调控各类细胞的增殖分化和组织发育，它们自身表达失控后将导致细胞的无限增殖，导致癌症的发生。EGR2(The early growth response factor 2)是真核生物中另一锌指类基础转录因子，在神经系统的发育调控中有关键作用。本研究克隆了猪KLF家族中Klf5、Klf7和Egr2包括完整CDS的mRNA序列；分别扩增了猪Klf4、Klf5、Egr2的第3、第2、第1内含子并对它们染色体定位；通过半定量RT-PCR研究了Klf4、Klf5、Klf7和Egr2在猪十个组织中的相对表达；还探讨了胰岛素和克伦特罗对它们在前脂肪细胞3T3-L1中表达的影响，得出了如下结果：1．克隆1374bp的Klf5全长CDS，该基因编码457 aa的蛋白质产物，与人、大鼠分别有95.8％和89.4％的同源性。2．克隆1112bp的Klf7 mRNA，包含909bp的全长CDS，编码302 aa的蛋白质产物，与人、大鼠分别有98.3％和97％的同源性。3．克隆1500bp的Egr2 mRNA，包含1416bp的全长CDS，编码471 aa的蛋白质产物，与人、大鼠分别有91.8％和88.4％的同源性。4．克隆分别长916bp、1027bp、1342bp的Klf4第3内含子、Klf5第2内含子和Egr2第1内含子。5．将猪Klf4、Klf5、Egr2分别染色体定位于1q28-29、11q13-14、14q23-25，它们的定位和人相应基因染色体定位有对应关系。6．用半定量RT-PCR技术确定了Klf4、Klf5、Klf7和Egr2在猪肌肉、脂肪、肺、肝、脾、小肠、肾、胃、大脑和心等中的组织表达谱。7．在3T3-L1前脂肪细胞中，胰岛素刺激Klf4的表达，而抑制Klf5和Egr2的表达；克伦特罗刺激Klf5的表达，抑制Egr2的表达，对Klf4达则随着浓度的升高由刺激变为抑制；Klf7在3T3-L1前脂肪细胞中则检测不到有表达。