化肝通络方对大鼠活化的肝星状细胞增殖的影响及其作用机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caodahai
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目的:进行原发性胆汁性肝硬化体外研究,探索化肝通络方对大鼠肝星状细胞增殖的影响及其作用机制。方法:1.含药血清的制备:40只清洁级SD大鼠随机分为化肝通络方高剂量组(73.7g/kg/d)、中剂量组(36.8g/kg/d)、低剂量组(18.4g/kg/d)及空白组(0.9%NaCl),持续灌胃7天,每天1次,每次2m1,最后1天灌胃之前禁食24h,最后一次灌胃1h后腹主动脉采血,静置,离心,补体灭活,过滤细菌,分装,-80℃冻存。2.药物成分测定:质谱分析药物组成并与标准品比对,确定其药物成分。3.化肝通络方对大鼠活化肝星状细胞增殖的影响:MTT法测定不同组别含药血清作用于活化肝星状细胞24h后,各组之间OD值的改变,确定药物对细胞增殖的影响。4.化肝通络方影响活化肝星状细胞增殖作用机制研究:不同组别含药血清和空白组血清作用于相同条件活化肝星状细胞24h,提取蛋白后western blot法检测TGF-β1、smad2/3、 smad7蛋白质的表达,确定本方对TGF-β/smad通路的影响。结果:1.含药血清制备:质谱分析对照品与中药原液,确定药液中含有化肝通络方有效成分。2.化肝通络方对大鼠肝星状细胞增殖的影响:中药作用后的细胞DO值显著下降,说明本方对肝星状细胞的增殖起到抑制作用,但是低剂量组无统计学差异(P>0.05),中、高剂量组差异明显(**P<0.01)。3.化肝通络方影响肝星状细胞增殖作用机制研究:western blot检测结果显示与空白组相比含药血清低剂量组TGF-β1、smad2/3蛋白无明显差异(*P>0.05),中高剂量组含量下降(*P<0.05);含药血清中高剂量组smad7蛋白表达明显上升(*P<0.05),低剂量组差异不显(P>0.05)。结论:1.化肝通络方药液含有目标成分。2.化肝通络方含药血清对活化肝星状细胞增殖活动具有抑制作用。3.化肝通络方治疗原发性胆汁性肝硬化的其中一条路径是通过TGF-β/smad信号通路实现。
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