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生长激素释放肽(Ghrelin)是生长激素促分泌素受体(GHS-R)的一种内源性配体,1999年从小鼠和人的胃组织中成功分离并鉴定。Ghrelin对于下丘脑-垂体-性腺的内分泌和旁分泌效应为新近的研究热点。本试验以小梅山猪为实验材料,研究Ghrelin在小梅山猪生殖轴的表达情况,旨在探究Ghrelin对动物繁殖性能的影响,从而为丰富动物生殖机理和早熟品种选种选育提供理论依据。根据NCBI上已发表的野猪Ghrelin mRNA序列,在跨外显子序列处设计一对引物。采集小梅山猪胃底腺组织,利用Trizol法提取总RNA,然后用RT-PCR法进行cDNA扩增,获得了长度为341bp的目的片段。运用TA克隆法,将目的片段连接到pMD19-T载体上,通过蓝白斑筛选和菌液PCR对重组质粒进行鉴定。测序后进行比对发现,目的片段长度为341bp,其编码的氨基酸与人Ghrelin氨基酸有3个氨基酸不同,同源性为89.3%;与沙鼠、小鼠、大鼠、犬也有3个氨基酸不同,同源性均为89.3%;与牛、绵羊有6个氨基酸不同,同源性为78.6%;与鸡有13个氨基酸不同,同源性为53.6%。这为分离、克隆小梅山猪Ghrelin基因全序列提供了可能。采集初生、初情期以及性成熟公小梅山猪垂体、下丘脑、睾丸、附睾和母小梅山猪垂体、下丘脑、卵巢、子宫组织,利用Trizol法提取总RNA。RT-PCR法对其进行组织表达谱研究,发现在上述组织中均有Ghrelin mRNA的表达,表明Ghrelin mRNA的表达在小梅山猪上不具有组织特异性。利用实时荧光定量PCR法测定母小梅山猪生殖轴各组织中Ghrelin mRNA相对表达丰度变化。结果表明:根据性成熟生殖轴不同组织Ghrelin mRNA表达量分析,以性成熟小梅山猪卵巢Ghrelin mRNA表达量为校正样本,表达量为1,下丘脑相对表达量为0.449,垂体相对表达量为0.316,与卵巢差异显著(P<0.05),垂体与下丘脑之间差异不显著(P>0.05);根据生长发育不同阶段Ghrelin mRNA表达量分析,同样以性成熟小梅山猪卵巢Ghrelin mRNA表达量为校正样本,表达量为1,初生期卵巢、初情期卵巢相对表达量分别为0.421与0.740,与性成熟之间差异显著(P<0.05)。