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背景与目的近来研究发现,转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)的发生发展中起着重要的作用。然而,通过转录和翻译后释放出来的TGF-β1以无活性的前体复合物形式储存,必须通过复杂的过程激活后才能发挥其生物活性。血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1, TSP-1)是TGF-p,重要的激活剂。Smads蛋白通过介导活化后的TGF-β1的信号传导,在DN肾脏纤维化过程中发挥着必不可缺的作用。在DN中,关于TSP-1/TGF-β1/Smad通路的研究目前国内外均较少见报道。在糖尿病动物体内应用血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(AngiotensinⅡReceptor Blocker, ARB)观察其对肾脏组织中TSP-1/TGF-β1/Smad通路的影响,目前国内外尚未见报道。本研究通过链脲佐菌素(Streptozocin, STZ)建造糖尿病大鼠模型拟了解其肾脏组织中TSP-1、TGF-β1及磷酸化Smad2/3 (p-Smad2/3)蛋白的表达情况。同时观察替米沙坦干预对TSP-1/TGF-β1/Smad通路的影响,探讨TSP-1/TGF-β1/Smad通路在DN发病中的作用及ARB治疗DN可能的分子机制,为DN的防治提供新的理论依据。方法49只雄性SD大鼠,正常对照组(A组)10只。39只大鼠采用STZ一次性腹腔注射法(60mg/kg)建造大鼠糖尿病模型(8只大鼠造模未成,剔除出本实验)。将造模成功的31只大鼠分为糖尿病未干预组(B组,n=16)和替米沙坦干预组(C组,n=15)。C组给予替米沙坦(10mg.Kg-1.d-1)灌胃,A组和B组给予等量的生理盐水灌胃作对照。共处理12周。至实验末,除去死亡及血糖(Glucose, Glu)下降至16.7mmol/L以下的大鼠,A组大鼠剩10只,B组剩10只,C组剩11只。监测各组大鼠体重及血糖；测定血肌酐(Serum creatinine, Scr)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen, BUN)及24h尿蛋白定量；光镜HE、Masson染色观察肾脏病理变化；免疫组化SP法检测肾组织中TSP-1、TGFβ-1及p-Smad2/3蛋白的表达；逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肾组织中TSP-1 mRNA及TGF-β1 mRNA的表达。所有数据采用SPSS14.0统计软件包进行统计分析,显著检验水准为α=0.05。结果1.病理改变：光镜下观察,HE及Masson染色A组未见明显异常,B组大鼠肾小球和肾小管结构紊乱,肾脏组织内有炎症细胞浸润,系膜区扩张,基质沉积,肾小球弥漫性增大,肾小管上皮细胞空泡变性、萎缩,偶有肾小管间质出现纤维化病变。2.TSP-1、TGFβ-1及p-Smad2/3三种蛋白在A组大鼠肾脏组织中不表达或很少有表达。在B组肾脏中以上三种蛋白均有大量的表达,都主要表达于血管内皮细胞、系膜细胞、肾小管上皮细胞、间质细胞及包曼氏囊上皮细胞等。与A组相比,B组大鼠肾脏中上述三种蛋白的表达均明显上调(均P<0.01),同时伴有TSP-1 mRNA及TGF-β1 mRNA表达的上调(均P<0.01)；相关性分析显示TSP-1、TGFβ-1及p-Smad2/3三种蛋白之间存在显著正相关关系(均P<0.01)。三种蛋白的表达水平分别与肾脏功能指标24h尿蛋白、肾脏肥大指数(SW/BW)之间也均呈显著正相关(均P<0.01)。3.C组大鼠肾脏病理改变较B组有所减轻,且肾脏组织中TSP-1、TGF-β1及p-Smad2/3蛋白及相应mRNA的表达均比B组显著下降(均P<0.01),但仍高于A组(P<0.01或0.05)。结论1.TSP-1/TGF-β1/Smad信号通路可能在DN的发生发展中起着重要作用。2.ARB类药物替米沙坦可能通过阻滞肾脏组织中TSP-1/TGFβ-1/Smad信号通路实现对DN肾脏的保护作用。