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目的:1.探讨改良的左侧喉返神经（LRLN）旁淋巴结清扫术在微创食管癌手术（MIE）中的应用2.探讨食管癌患者双侧喉返神经旁淋巴结转移的影响因素36.组蛋白修饰谱变化与食管癌临床和病理分期及预后的相关性4.H2Bub表达上调在食管癌发生发展中的研究方法和结果:本课题分四部分进行第一部分:回顾性分析了 194例食管癌患者微创手术的临床病理资料,根据胸腔镜下三组不同的左侧喉返神经旁淋巴结清扫手法（A组75例:传统手术方法;B组80例,骨骼化手术方法;C组39例:新改良的手术方法）进行了对比研究。结果显示:1.三组左侧喉返神经转移率分别为A组12%、B组20%和C组28%,A组转移率明显低于C组,且比有统计学意义（χ2=4.658 P=0.031）。2.A组平均清扫左侧喉返神经旁淋巴结1.59±0.84枚明显少于B组4.02± 1.96枚和C组4.31 ±2.14枚,且比有统计学意义（P<0.05）。3.声音嘶哑C组发生率为15.4%,显著低于B组（21.3%）,高与A组（13.3%）,但三组对比无统计学差异（P>0.05）。第二部分:回顾性分析了 137例食管癌患者微创手术的临床病理资料,对喉返神经旁淋巴结转移的影响因素做了初步研究。结果显示:1.左、右侧及双侧喉返神经旁淋巴结转移率分别为2 1.17%、21.89%和8.76%。2.单素分析发现右侧喉返神经旁淋巴结转移与分化、T分期、脉管癌栓有相关性（P<0.05）。左侧喉返神经旁淋巴结转移与分化、T分期有相关性（P<0.05）3.多因素分析显示,肿瘤分化程度和脉管癌栓与右喉返神经旁淋巴结转移有关,其0R值分别为3.707和3.053。肿瘤分化程度与左喉返神经旁淋巴结转移有关,其0R值分别为3.960。第三部分:用免疫组化方法检测组中75例食管癌组蛋白H3K9Ac、H3K27Me3、H2BS112G1cNAc及H2Bub表达,筛选出与食管癌相关的组蛋白修饰类型。结果显示:1.食管癌组织标本中H2Bub、H3K9ac、H2BS112G1cNAc蛋白强阳性表达率为84%、48%、21.3%,H3K27m3蛋白表达阳性表达率为52%,同癌旁组织相比,癌组织H2Bub、H3K9ac、H2BS112G1cNAc、H3K27m3水平有64%、46.7%、20.9%、26.7%表达上调。H2Bub与肿瘤分化有关（χ2=0.243 p=0.037）。2.H2Bub 低分化组中位生存时间（36.00月）明显短于高、中分化组（71.63±11.21、58.88±3.95月）,且有统计学差异（P<0.05）;H3K27m3的表达水平上调组中位生存时间好于稳定组,两组差异明显,且有统计学意义（P<0.05）,提示H3K27m3的表达水平上调预后较好。食管癌组织H2BS112G1cNAc表达强阳性组与阳性组、表达水平上调组与稳定组中位生存时间差异有明显统计学（P<0.05）,提示H2BS112G1cNAc的表达强阳性和表达水平上调预后差。3.H3K9ac与H2Bub、H2BS112G1cNAc的表达具有相关性（P<0.05）。第四部分:由第三部分鉴定出H2Bub组蛋白修饰分子,构建过表达RNF20质粒和敲除USP22siRNA;选用食管癌细胞ECA109和人食道上皮永生化细胞株HEEC为研究对象,采用CCK8、细胞划痕等方法研究H2Bub表达上调对细胞增殖和侵袭的影响;并进行裸鼠皮下荷瘤的动物模型验证。结果:1.过表达RNF20质粒转染效果差,我们准备进行慢病毒包装实验,但由于抗击新冠疫情所中断,我们会在以后进一步补充该实验。2.siRNA成功沉默ECA109和HEEC中USP22的表达,并建立了稳定过表达H2Bub的细胞系。3.CCK8增长曲线显示两种细胞株的细胞增殖速度明显快于空载体组,差异具有统计学意义（P<0.05）;4.细胞划痕实验显示,相比空载体组,两种细胞株划痕的间距有明显减小趋势。5.裸鼠皮下荷瘤的动物模型显示实验组（USP22siRNA）较对照组（NCsiRNA）瘤体增大明显并有显著差异（P<0.05）。结论:1.新改良的左侧喉返神经淋巴结清扫方法在微创食管癌手术中可以提供足够的淋巴结清扫数量和减少喉返神经麻痹的发生率,在临床工作中是安全可靠的,可以推广应用的。2.肿瘤分化程度和脉管癌栓是右喉返神经旁淋巴结转移的危险因素;肿瘤分化程度是左喉返神经旁淋巴结转移的危险因素。3.食管癌组织标本中H2Bub、H3K9ac、H2BS112G1cNAc蛋白表达明显高于癌旁组织,同癌旁组织相比,癌组织 H2Bub、H3K9ac、H2BS112G1cNAc、H3K27m3水平有不同程度的表达上调。4.低分化组H2Bub表达水平上调预后差;H2BS112G1cNAc的表达强阳性和表达水平上调预后差。H3K27m3的表达水平上调预后较好。5.CCK8实验实验证明H2Bub促进了 ECA109和HEEC细胞的增殖能力;裸鼠皮下荷瘤的动物模型证实了 H2Bub可促进食管癌体内成瘤能力。