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目的:探讨脾阴虚状态下大鼠胃肠葡萄糖转运和线粒体能量代谢的变化情况,并观察滋补脾阴方药对其的干预作用。方法:首先将健康的SPF级的Wistar雄性大鼠适应性喂养3天,然后将其随机分为两组:正常组6只,模型组14只。采用经典复合因素造模,即采用饮食不节、劳倦过度并结合伤阴药的方法建立脾阴虚大鼠模型。造模时间共38天,分为3个时间段:①第1-14天为脾气虚造模阶段,饱食1日+禁食2日,即三日为一循环,并每日游泳至力竭。②第15-24天为脾阴虚造模阶段,将模型组中脾气虚造模成功的大鼠归入脾阴虚阶段,每日灌胃伤阴药药液1 mL/100 g。③第25-38天为滋补脾阴方药干预阶段:将模型组随机分为脾阴虚组和滋补脾阴方药组,每组6只大鼠。滋补脾阴方药组每日给予大鼠滋补脾阴方药药液1 mL/100 g灌胃,正常组与脾阴虚组给予等体积生理盐水灌胃。取胃肠组织应用Western blotting和qPCR技术检测葡萄糖转运蛋白(GLUTs)表达情况并验证滋补脾阴方药的干预作用;通过细胞能力代谢分析仪检测骨骼肌线粒体呼吸链复合物和ATP合酶活性以反映线粒体能量代谢的变化。结果:一、脾阴虚大鼠葡萄糖转运蛋白的变化及滋补脾阴方药干预作用1.Western blotting法检测大鼠胃GLUT1、GLUT4蛋白表达:与正常组相比较,脾阴虚组大鼠胃GLUT1、GLUT4蛋白表达水平均有明显降低(P<0.001,P<0.01);相比于脾阴虚组,滋补脾阴方药组胃GLUT1、GLUT4蛋白表达均有上调(P<0.001,P<0.05)。2.Western blotting法检测大鼠空肠GLUT1、GLUT5蛋白表达:与正常组相比较,脾阴虚组大鼠空肠GLUT1、GLUT5蛋白表达水平均有所降低(P<0.05);相比于脾阴虚组,滋补脾阴方药组空肠GLUT1、GLUT5蛋白表达均上调(P<0.05)。3.qPCR法检测大鼠胃GLUT1、GLUT4 mRNA表达变化:脾阴虚组大鼠与正常组相比,胃GLUT1 mRNA表达降低(P<0.01),GLUT4 mRNA表达有下降趋势;相比于脾阴虚组,滋补脾阴方药组GLUT1、GLUT4 mRNA表达均有升高(P<0.05);与正常组比较,滋补脾阴方药组GLUT1、GLUT4 mRNA表达也均有升高(P<0.05)。4.qPCR法检测大鼠空肠GLUT1、GLUT5 mRNA表达变化:与正常组相比较,脾阴虚组大鼠空肠GLUT1、GLUT5 mRNA表达均有所降低(P<0.05);与脾阴虚组相比较,滋补脾阴方药组GLUT1、GLUT5 mRNA表达均有明显增加(P<0.01);相比于正常组,滋补脾阴方药组GLUT1 mRNA表达有所升高(P<0.05),GLUT5 mRNA表达有升高趋势。二、脾阴虚大鼠线粒体能量代谢的变化及滋补脾阴方药干预作用1.骨骼肌线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ的活性检测:相比于正常组,脾阴虚组大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ活性升高(p<0.01);经滋补脾阴方药干预后,滋补脾阴方药组相比于脾阴虚组大鼠骨骼肌线粒体呼吸链复合物I、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ的活性有明显降低(p<0.01),与正常组相比较均无显著性差异。2.骨骼肌线粒体ATP合酶活性检测:与正常组相比,脾阴虚组骨骼肌线粒体ATP合酶活性有明显升高(P<0.01);相比于脾阴虚组,滋补脾阴方药组骨骼肌线粒体ATP合酶活性降低(P<0.01),与正常组相比无明显差异。结论:1.脾阴虚状态下大鼠胃组织GLUT1、GLUT4和空肠GLUT1、GLUT5蛋白和mRNA表达降低,可能是导致胃肠葡萄糖等营养物质消化吸收障碍的重要因素之一。滋补脾阴方药能够通过上调大鼠胃组织GLUT1、GLUT4和空肠GLUT1、GLUT5蛋白和mRNA表达,来改善脾阴虚大鼠胃肠道葡萄糖转运能力。2.脾阴虚状态下大鼠线粒体能量代谢出现异常增加,滋补脾阴方药可以降低线粒体呼吸链复合物的异常活性,减弱ATP的合成,改善线粒体能量代谢来减轻脾阴虚证对骨骼肌线粒体的损伤从而实现对线粒体功能和结构的保护作用。