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八角(Illicium verum Hook.f.)为木兰科八角属植物,原产于我国的广西,其干燥成熟的果实中含有芳香油5%~8%、脂肪油约22%,以及蛋白质,是中国传统的调味香料和中药材。八角叶来源丰富,是八角茴香油原料之一,每100 kg八角茴香鲜叶可生产八角茴香油0.8~1.0 kg,得油率约1%,其主要成份为茴香脑,具有刺激作用,能促进胃肠蠕动,缓解腹部疼痛,并能用于祛痰。近年已有人对八角叶总黄酮的提取以及捕获自由基作用的机理进行了研究,证明八角茴香叶富含黄酮类化合物。 本课题研究内容包括以下四个部分: (1)通过微波辅助提取八角叶中的黄酮类化合物。通过Plackett-Burman设计和响应面法确定八角茴香叶黄酮的最佳微波提取条件:乙醇浓度67%、乙醇与八角叶质量比值26∶1(mL∶g)、微波提取温度为75℃、微波起始功率500W、微波时间8 min。最优条件下的黄酮的提取率为6.97%。 (2)通过大孔树脂和制备色谱两种方式纯化八角茴香叶黄酮。 通过静态吸附筛选了D101、AB-8、NKA-9以及聚酰胺四种树脂,选取D101大孔树脂动态纯化八角叶黄酮,纯化条件为,样品液上样质量浓度C=1.0 mg/mL、pH=4,上样吸附流速为2 BV/h,洗脱溶液为70%乙醇,解吸体积为3 BV,流速为2 BV/h。 通过Grace RevelensTM全息快速纯化色谱系统纯化八角叶黄酮,制备色谱柱填料为12 g RevelerisTM RP C18 cartridge,样品液上样体积为15 mL,浓度为C=10 mg/mL、PH=4,流动相为5%乙酸溶液(A)和甲醇(B),流速为10 mL/min,检测波长为268nm(UV1)和328nm(UV2)。 (3)结合液相色谱-飞行时间质谱串联和液相色谱-三重四级杆质谱串联两种方式定性定量八角叶中的黄酮组份。通过比对标准品,确定了五种黄酮成份,分别为牡荆素2"鼠李糖苷(251.940μg/mg);芦丁(1.114μg/mg);牡荆素(0.593μg/mg);金丝桃苷(0.308μg/mg);染料木苷(0.126μg/mg)。通过分析二级质谱信息,研究黄酮裂解规律,推断七种黄酮成份,分别为牡荆素4"葡萄糖(2.049μg/mg);牡荆素2"木糖苷(16.512μg/mg);异鼠李素芸香糖苷(0.658μg/mg);山奈酚-7-O-葡萄糖苷(0.208μg/mg);槲皮素-3-O-木糖苷(1.255μg/mg);异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(0.301μg/mg);异鼠李素-3-O-阿拉伯糖苷(0.264μg/mg)。 (4)总抗氧化能力、清除羟自由基能力、清除DPPH自由基能力中,八角叶总黄酮整体都高于水解液。清除超氧阴离子、抑制脂质过氧化能力中,水解液都比八角叶总黄酮具有更显著的作用。细胞模型的抗氧化能力中,两种样品液对HT-29细胞在浓度为50-800ug/mL范围内都没有细胞毒性,且八角叶总黄酮比其分离的主成份水解液有更高的细胞内抗氧化作用。