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泡沫病毒属于反转录病毒科泡沫病毒亚科,其在体外虽可使细胞发生强烈病变,在体内却不表现任何病症,处于长期潜伏感染状态,而其潜伏机制目前尚不清楚。目前为止,只有一篇关于过表达早幼粒细胞白血病蛋白(PML)能够抑制人泡沫病毒(PFV)复制的报道,但随后的研究却表明,PML与PFV处于潜伏状态无关。因而可推知在细胞中一定存在其它一些重要的细胞蛋白介导泡沫病毒处于长期潜伏状态。
本文以牛泡沫病毒中国毒株BFV3026为材料,利用酵母双杂交系统,通过钓取与BFV的反式激活因子BTas相互作用的细胞蛋白,探讨BFV感染细胞后病毒与宿主细胞的相互作用,并期望通过该方法,找到抑制BTas反式激活作用以使BFV处于潜伏感染的细胞蛋白。除此之外,本文还对BTas自身的功能进行深入探究。
本文获得了以下重要结果及结论：1.通过酵母双杂交首次“钓”出并确证了两种与BTas相互作用的细胞蛋白：干扰素诱导的35 KDa的蛋白(IFP35)和NF-kB旁路中重要的蛋白(RelB);2.选择IFP35进行深入的功能探讨,发现IFP35能够通过其与BTas的相互作用抑制BTas介导的对BFV自身主要启动子LTR的反式激活作用,这种抑制作用依赖于其结构的完整性；3.IFP35不但能够抑制BFV的复制,亦能够抑制PFV的复制；4.实验证实内源性的IFP35对BFV的复制具有很强的抑制作用,由此推测IFP35可能是BFV在宿主细胞内处于长期潜伏的重要原因；5.在对IFP35进行研究的基础上,发现另一与IFP35具有相似结构的蛋白Nmi也能有效抑制BFV的复制,并证实Nmi不但能够通过其与BTas的相互作用来抑制BTas介导的对BFV LTR的反式激活功能,还能抑制BTas对内部启动子(IP)的反式激活作用,其抑制机理是通过与BTas相互作用后将BTas滞留在浆中而实现的；6.发现BTas能够在体内形成二聚体,并界定了其二聚化的区域为46-62 aa;证实当缺失了该二聚化区段后,虽然并不影响BTas的核定位及其结合LTR和IP的能力,却会使得BTas的反式激活作用丧失,可推知BTas在体内的活性形式应是其二聚体。