目的:本研究旨在研究白鲜皮（Cortex Dictamni,CD）中含呋喃类化合物经代谢活化产生的反应性代谢物（reactive metabolites,RMs）共价修饰肝脏蛋白的表征,各呋喃类化合物对蛋白修饰的时间过程,以及不同批次白鲜皮中各呋喃类成分对蛋白修饰水平。方法:采用回流提取、减压浓缩及冷冻干燥法制备白鲜皮醇提物（ethanol extract of Cortex Dictamni,ECD）。首先分别给予正常雄性C57小鼠75 g/kg ECD和CYP450非特异性抑制剂ABT（100 mg/kg,ig,2天）,并于系列时间点后采集全血和肝脏样品,采用液相色谱-质谱法测定血清中呋喃类化合物的含量、肝脏中呋喃类化合物经代谢激活形成的RMs与谷胱甘肽（glutathione,GSH）的结合物,结合完全酶解法测定RMs与肝脏蛋白结合物,明确白鲜皮中呋喃类化合物的药代动力学、代谢激活以及共价修饰肝脏蛋白的时间过程。然后,考察特异性CYP3A诱导剂地塞米松（dexamethasone,DEX）和抑制剂酮康唑（ketoconazloe,KTZ）以及谷胱甘肽耗竭剂L-丁硫氨酸-（S,R）-亚砜亚胺（L-buthionine-（S,R）-sulfoximine,BSO）对共价修饰蛋白的干预作用,以明确白鲜皮肝损伤成分共价修饰肝脏蛋白作用与肝损伤的关系。分别将白鲜皮中代表性呋喃化合物对照品黄柏酮、梣酮、柠檬苦素、白鲜碱、白鲜皮醇提物的二氯甲烷层在小鼠体内和小鼠肝脏微粒体孵育以确证筛查结果,并进一步通过黄柏酮、柠檬苦素与含赖氨酸的模拟肽段的共孵育来验证蛋白结合物的表征结果。此外,考察了16批ECD的肝损伤程度和模式、化学成分、尿液RMs-GSH结合物和蛋白结合物,采用主成分分析、聚类分析和正交偏最小二乘法分析方法从呋喃类化合物含量、代谢激活、共价修饰蛋白三个层面分析了不同批次白鲜皮肝损伤差异的机制以及涉及的关键呋喃类化合物。结果:ECD中有6种呋喃类化合物可在代谢激活后共价修饰肝脏的赖氨酸残基或半胱氨酸残基,分别是:白鲜碱、黄柏酮、柠檬苦素、梣酮、Fraxinellonone、9β-羟基梣酮。给予ECD后,呋喃喹啉类化合物如白鲜碱的血清浓度在0.25 h时达到峰值,其代谢激活生成的RMs主要与肝脏GSH发生共价结合;而柠檬苦素类化合物的血清浓度在0.5-0.75 h达到峰值,其代谢激活生成的RMs主要与肝脏蛋白发生共价结合。黄柏酮和柠檬苦素生成的RMs可“叠加”地与模拟肽段的赖氨酸残基共价结合。各呋喃类共价修饰肝脏蛋白水平与肝损伤程度呈正相关,表明呋喃类化合物经代谢激活共价修饰肝脏蛋白在白鲜皮的肝损伤中发挥重要作用。不同批次白鲜皮肝损伤模式均为肝细胞坏死,但是损伤程度差异较大。从呋喃化合物含量、代谢激活程度以及共价修饰蛋白三个层面发现不同批次白鲜皮肝损伤程度差异的关键是梣酮含量的变异。结论:中药白鲜皮多个含呋喃类化合物可经代谢激活共价修饰肝脏蛋白质,白鲜皮中吸收较早的呋喃类化合物优先与GSH发生结合,而吸收较晚的呋喃类化合物主要与肝脏蛋白发生共价结合。白鲜皮中呋喃类化合物的共价修饰蛋白作用在白鲜皮的肝损伤中发挥重要作用。不同批次的白鲜皮所致肝损伤程度差异巨大,其中梣酮含量的变异至关重要。