论文部分内容阅读
本文研究目的是通过靶向调控Lin28B/let-7基因信号通路,进一步证实Lin28B/let-7之间相互作用的分子机制及其与胰腺癌化疗耐药性的关系,探讨调控Lin28B/let-7通路改变胰腺癌化疗耐药性的可能性。方法是实验主要包括胰腺癌AsPC-1细胞的传代培养、western blotting实验、质粒转染技术实验、实时荧光定量PCR技术实验以及MTS细胞活力实验。实验大概内容:首先构建过表达Lin28B质粒pCMV6-Lin28B,基因沉默质粒pGFP-shLin28B以及对应的空白质粒,并分别以相同的条件根据质粒转染技术转染至AsPC-1细胞,western blotting实验检测转染后细胞体内Lin28B蛋白表达量用以判定质粒转染是否成功。其次,提取不同转染后的胰腺癌细胞内的总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测Let-7 miRNA,Lin28B mRNA的表达量情况。最后,不同质粒转染的癌细胞与预先设定不同浓度的吉西他滨药物溶液在相同条件下孵育一段时间,MTS细胞活力检测实验测定不同处理的细胞对吉西他滨药物的耐受性。结果是Western blotting实验结果表明,胰腺癌细胞中转染高表达质粒的细胞比转染基因沉默质粒的细胞中Lin28B表达量显著性增加,实时荧光定量PCR结果显示不同质粒转染的细胞体内let-7 miRNA家族表达水平有显著性差异,同样Lin28BmRNA也有显著性不同。MTS细胞活力检测数据表示AsPC-1癌细胞体内Lin28B,let-7分子量的不同,导致胰腺癌细胞对吉西他滨药物的敏感性不同。结论是胰腺癌细胞中Lin28B基因可能通过靶向调节let-7表达水平使癌细胞对化疗药物产生耐药性,而调控Lin28B/let-7信号通路可能在逆转胰腺癌对吉西他滨化疗药物耐药性方面具有深入研究价值。