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研究背景机体的免疫系统功能状态同恶性肿瘤的发生发展密切相关。2002年Schreiber和Dunn在肿瘤免疫监视理论的基础上提出了肿瘤免疫编辑学说(cancer immunoediting),认为免疫系统除了可以识别并清除肿瘤细胞,还具有免疫重塑功能,即对肿瘤细胞进行免疫选择,使免疫原性弱的肿瘤细胞进入免疫逃逸阶段,最终实现肿瘤进展。调节性T细胞(Treg)是免疫抑制中的重要一环,可以诱导肿瘤细胞通过免疫逃逸逃避效应细胞的识别和杀伤,促进肿瘤的发生发展。IL-35是2007年由Collison等和Niedbala等两个研究小组近乎同时发现的新型细胞因子,由IL-12的α亚基IL-12p35和IL-27的p亚基EBB以异二聚体形式组成。IL-35是主要来源于调节性T细胞(Treg)的抑制性细胞因子,它不仅可以直接促进Treg分化、增殖和发挥最大免疫调节作用,还可以诱导产生新型iTR35细胞,从而级联放大机体的免疫抑制调控网络,是促进肿瘤免疫逃逸的重要因素。新近的研究证明,除了调节性T细胞外,调节性B细胞、部分肿瘤细胞均可表达IL-35,提示IL-35同肿瘤的发生、发展关系密切。在胰腺癌、直肠癌等肿瘤的研究中,可检测到IL-35的表达,并且IL-35的高表达同不良的临床病理因素相关。第一部分IL-35在乳腺癌浸润淋巴细胞和血浆中的表达及其临床意义研究目的 明确IL-35在乳腺癌患者中的表达情况,分析IL-35高表达与各临床病理因素之间的相关性,评估IL-35表达与患者预后转归的关联及能否作为乳腺癌新的生物标记物。研究方法入组2008年01月至2010年05月行手术切除的、具有完整随访资料的女性乳腺癌患者110例,应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中IL-35表达情况,探讨IL-35表达同乳腺癌TNM分期、HER-2表达及无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)的关系。入组2014年03月至2014年12月确诊的乳腺癌患者60例及健康对照30例,应用ELISA方法检测乳腺癌患者血浆中IL-35表达情况,探讨IL-35表达同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67及分级的关系。研究结果在乳腺癌组织浸润淋巴细胞中发现IL-35表达,110例乳腺浸润性导管癌患者中,IL-35高表达者19例,占17.3%,低表达者48例,占43.6%,不表达者43例,占39.1%,IL-35在肿瘤浸润淋巴细胞中的表达水平在年龄大于50岁、术后病理分期Ⅲ期、肿块大于2cm及ER阴性患者中显著升高(p<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,肿瘤浸润淋巴细胞高表达IL-35的肿瘤患者组PFS和OS较低表达组显著缩短(p<0.05)。乳腺癌患者血浆中IL-35水平高于健康对照组,但差别无统计学意义(0.24±0.11 ng/ml vs 0.23±0.10ng/ml, P=0.544)。但在乳腺癌患者中,Ⅲ期患者血浆IL-35表达水平显著高于Ⅰ和Ⅱ期的患者(0.29 ±0.13ng/ml VS 0.22±0.09 ng/ml, P=0.024),腋窝淋巴结阳性患者的血浆IL-35表达水平显著高于阴性患者(0.28±0.13 ng/ml VS 0.20±0.05ng/ml, P=0.004),但患者血浆IL-35表达水平与PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67表达及分级无明显相关性(p>0.05)。结论乳腺癌组织肿瘤浸润淋巴细胞中表达IL-35,高表达IL-35同多个预后不良因素密切相关,血浆中IL-35表达同临床分期和淋巴结转移密切相关。IL-35表达可以作为乳腺癌的不良预后因子。第二部分IL-35对乳腺肿瘤细胞生物学功能的影响及机制研究目的探讨IL-35对乳腺肿瘤细胞增殖、细胞周期、凋亡的影响及其分子机制。研究方法将外源性IL-35加入人乳腺癌细胞系MCF-7进行培养,应用MTT法检测增殖,流式细胞术检测细胞周期,比较实验组和对照组在增殖、凋亡及细胞周期中的差异。应用逆转录-PCR (RT-PCR)方法检测实验组和对照组促增殖相关分子(cyclin B、cyclin D、cyclin E、cdk2、cdk4)、抑制增殖相关分子(p15、 P18、p21、p27、p53)、促进凋亡相关分子(Fas、FasL、TRAIL、Bax)、抑制凋亡相关分子(FLIP、Bcl-2、survivin)的表达水平,比较两组表达差异。从转录水平探讨IL-35对乳腺癌细胞增殖和凋亡相关分子的影响。研究结果实验组增殖率较对照组显著提高,呈时间和浓度依赖性,提示IL-35在体外有促进乳腺癌细胞增殖的作用。与对照组相比,各实验组S期细胞的比例升高,浓度为0.2、10、50ng/ml组的S期细胞比例分别为：27.11%,29.17%,32.76%,34.80%,提示随着IL-35浓度升高,乳腺癌细胞增殖能力增强。与对照组相比,IL-35处理组的细胞增殖相关分子cyclin E、cdk2水平上调,抑制增殖相关分子p15水平下调,两组差别有统计学意义(p<0.05)。IL-35处理组促进凋亡相关分子Fas、TRAIL水平下调(p<0.05)。其他增殖及凋亡相关分子(cyclin B、 cyclin D、cdk4、p18、p21、p27、p53、FasL、Bax、 FLIP、Bc1-2、 survivin)水平变化实验组和对照组无显著差异(p>0.05)。结论IL-35可以通过调控促增殖相关分子cyclin E、cdk2上调、抑制增殖相关分子p15下调、促进凋亡相关分子Fas、TRAIL下调,促进乳腺肿瘤细胞增殖,抑制肿瘤凋亡而促进肿瘤的免疫逃逸。IL-35可作为乳腺肿瘤治疗潜在的靶点。