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大田作物杂草防除难和除草剂引起的作物药害,已成为作物生产实际中的两大问题。转抗除草剂基因的植物能增强作物对目标除草剂抗性,可解决除草剂药害和杂草防除问题,但存在改变植物遗传性状,减少作物品种多样性等生物安全问题。利用弱病毒载体pCB-CMVF209-no2b-Bar表达抗除草剂基因增强作物对目标除草剂抗性,是一种非转基因方法。一方面它较转基因方法简易,可能是解决除草剂药害和杂草防除问题的重要途径,另一方面它不改变植物的遗传性状,且只在烟草植物中长距离移动,没有生物安全问题,因此这一方法可能具有重要的应用潜力及学术价值。 本课题开展利用弱病毒载体表达Bar基因抗除草剂草丁膦的研究。一是构建含Bar基因的重组弱病毒载体,采用酶切连接法构建重组弱病毒载体pCB-CMVF209-no2b-Bar,经PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定,表明目的载体构建成功。二是开展了接种弱病毒后的烟草植株抗除草剂草丁膦的效果检测,采用农杆菌浸润法在烟草植株上接种弱病毒载体pCB-CMVF209-no2b-Bar和pCB-CMVF109、pCB-CMVF309,接种10天后喷施40%草丁膦(100倍液和200倍液)对烟草植株抗草丁膦的效果观测表明,喷施草丁膦10天后,含Bar基因的处理的烟草植株生长正常,对照植株死亡。研究结果表明,利用弱病毒载体表达抗除草剂bar基因可增强作物对目标除草剂抗性。