论文部分内容阅读
动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是一种缓慢而复杂的进行性病变过程。针对AS早期发病机制的研究，对于AS预防与治疗具有十分重要的意义。巨噬泡沫细胞的形成是AS早期病变的主要事件之一，其形成与巨噬细胞（macrophages, MΦ）内胆固醇的积累和代谢关系密切。摄入胆固醇过多或胆固醇外流过少，均可引起细胞内过量脂质堆积而使巨噬细胞转变为泡沫细胞。在泡沫细胞形成过程中，胆固醇外流受阻是重要环节。因此，促进细胞内胆固醇外流可预防和逆转泡沫细胞的形成，相关研究是近年来动脉粥样硬化病变防治的焦点之一。研究表明，胆固醇外流目前主要有以下四种途径：（1）介导胆固醇主要外流至高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）颗粒的水溶性扩散途径；（2）B类清道夫受体I（scavenger receptor class B type, SR-BI）介导的胆固醇外流途径；（3）三磷酸腺苷结合盒转运子G1（ATP binding cassette G1,ABCG1）介导的胆固醇外流途径和（4）三磷酸腺苷结合盒A1（ATP binding cassette A1, ABCA1）介导的胆固醇外流途径。此外，研究表明内源性载脂蛋白E（apolipoprotein E, apoE）也可介导MΦ的胆固醇外流。在上述众多胆固醇外流途径中，ABCG1和ABCA1介导细胞内大部分的胆固醇外流，有研究表明，ABCG1和ABCA1能协同且连续介导MΦ内60-70%胆固醇的外流。早期流行病学研究发现，法国人有高脂饮食的习惯，但其冠心病的发病率却很低，Siemann等人发现，这主要得益于红酒中的白藜芦醇（resveratrol, RES）。研究表明，RES主要通过抗脂蛋白的氧化、抗炎反应、调节脂质代谢等多种机制起保护心血管和防治AS的作用。在调节脂质代谢方面，RES在降低血清总胆固醇（total cholesterol, TC）和总甘油三酯水平的同时，对HDL水平未表现出降低作用。体外进一步研究发现，RES可促进小鼠腹腔巨噬泡沫细胞内的胆固醇向载脂蛋白AI（apolipoproteinAI, apoAI）的外流作用，该作用可能通过LXRa-ABCA1/ABCG1-apoAI信号通路实现。二苯乙烯苷（tetrahdroxstilnene glucoside, TSG）是RES的结构类似物，都属于二苯乙烯类。近来研究发现，TSG能够抑制大鼠AS的斑块发展，除与其抗炎、抗氧化作用有关外，还与其能够改善脂质代谢相关，主要表现在升高血清HDL胆固醇水平、降低TC和低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL )水平。上述研究结果显示，TSG影响了血清HDL的代谢，而后者在介导MΦ胆固醇的外流中发挥重要作用。这提示我们，TSG对AS的抑制作用可能与影响MΦ胆固醇的外流相关，目前国内外尚未见研究报道。因此，本实验研究采用RAW264.7泡沫细胞模型，研究TSG对胆固醇外流的影响，并探讨其可能机制。实验结果显示：1. MTT法检测不同浓度TSG（0、25、50、100和200μM）对RAW264.7细胞的影响，结果显示五种浓度对RAW264.7细胞的增殖均未产生显著影响，表明上述各浓度的二苯乙烯苷对RAW264.7细胞无明显毒性作用。2．高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）测定不同浓度TSG作用下，RAW264.7泡沫细胞内TC及胆固醇酯（cholesterol ester, CE）含量的变化情况，结果显示TSG可显著降低细胞内TC和CE的含量及CE/TC的比例，100μM TSG降低作用最明显。3. TSG可显著提高PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA的表达，其中以100μM影响最显著。4.免疫细胞化学结果显示，100μM TSG可显著增强RAW264.7泡沫细胞ABCA1蛋白的表达。5.当用TSG和PPARγ抑制剂GW9662分别处理或者共同处理RAW264.7泡沫细胞时，结果显示，TSG可通过增强LXRα、ABCA1和ABCG1的表达，减弱PPARγ抑制剂GW9662对PPARγ- LXRα-ABCA1/ABCG1信号通路的抑制作用。综上所述，TSG能够通过增强ABCA1和ABCG1的表达促进RAW264.7泡沫细胞胆固醇的外流，且该作用可能是通过PPARγ- LXRα-ABCA1/ABCG1信号通路实现的。