前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一。由于其发病隐匿，临床少有症状，早期诊断困难，经常由于出现远处转移才得以诊断，对晚期转移癌患者尚无有效治疗手段，预后较差。因此，如何能早期诊断、预防并阻断前列腺癌的转移已成为人们所关注的课题。目前，前列腺癌的生物诊断和生物治疗已成为研究热点之一，而前列腺癌特异膜标志物是实现生物诊断和生物治疗的基础，探索前列腺癌特异膜标志物在前列腺癌的发生发展机制的作用显得尤为重要。 前列腺特异膜抗原(prostate-specific membrane antigen，PSMA)是一种主要表达于前列腺上皮细胞膜上的，具有多种生物学活性的蛋白质。具有较高的前列腺组织特异性及病变特异性，是前列腺癌较为特异的生物学标志物及诊断、治疗的潜在靶点。相关研究提示，PSMA与前列腺癌细胞的恶性程度有一定的相关性，可能在前列腺癌的演变过程中起重要的作用。 [研究目的] 1．构建针对PSMA的shRNA真核表达载体； 2.观察RNAi沉默PSMA基因表达后，前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的变化，初步了解PSMA在前列腺癌中的生物学功能，为探索前列腺癌的发病机理提供一定的实验基础及理论依据。 [研究方法] 1.根据Genbank中PSMA基因的序列，分别选择PSMA基因的三个不同部位设计合成三对shRNA序列，克隆到真核表达载体pSilencer 2.1-U6-neo中，构建PSMA shRNA真核表达载体，并经限制性双酶切和部分.DNA测序鉴定； 2.经脂质体介导将表达载体转染至人前列腺癌LNCaP细胞系中，经G418(700μg/mL)筛选后获得阳性转染细胞株，分别命名为p.shRNAl、2、3，利用RT-PCR在RNA水平、利用Western blot在蛋白水平对干扰效率进行检测； 3.根据RT-PCR、Western blot的实验结果，选择抑制效率较高的转染细胞进行体外生物学行为的相关实验。连续5天随机选择3空细胞进行细胞计数，并绘制细胞生长曲线，观察干扰后细胞生长情况的变化；利用Transwell侵袭小室通过过膜细胞数的差异，探讨干扰因素对LNCaP细胞的体外侵袭能力的影响。 [结果] 1.经限制性双酶切和部分DNA测序证实成功构建了PSMA shRNA的真核表达载体，经阳离子脂质体介导转染LNCaP细胞中，并经G418筛选后获得阳性克隆细胞株； 2.RT-PCR结果显示p-shRNA1、2、3真核表达载体对PSMA mRNA表达抑制率分别为33.15﹪，9.26﹪，41.97﹪，Western blot结果显示对PSMA蛋白表达的抑制率分别为26.26﹪，6.47﹪，40.69﹪。故选择抑制率较高的p-shRNA3组细胞进行生物学行为的相关研究； 3.细胞生长曲线结果显示：转染干扰载体后，阴性对照p-NC组细胞生长与LNCaP细胞组变化不大，差异无统计学意义(P>0.05)，p-shRNA3组细胞生长加快，但与p-NC组生长曲线差异无统计学意义(p>0.05)；4.细胞体外侵袭力结果显示：阴性对照p-NC组与LNCaP细胞组问穿膜细胞数无明显差异(P>0.05)。而转染p-shRNA3组的穿膜细胞数明显增多，与阴性对照p-NC组差异有统计学意义(p<0.01)。p-shRNA3组细胞的侵袭指数为220.3﹪。 [研究结论] 1.成功构建了PSMA shRNA的真核表达质粒，并经证实对前列腺癌LNCaP细胞中的PSMA表达具有干扰效应； 2.RNAi特异性抑制LNCaP细胞PSMA的表达后，细胞侵袭力明显增强。初步提示，PSMA在前列腺癌发展中可能起负向调节作用，为探讨前列腺癌的发病机制提供新的线索。