微波辅助磁珠键合树枝状大分子及其用于生物固定化的研究

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生物大分子如蛋白质、酶等用于临床疾病诊断、分析检测、靶向药物运输的标记物等领域的研究受到了广泛关注。然而,生物大分子是一类具有特定生物活性的分子,游离态的蛋白或酶易受外界环境如温度、pH值、离子浓度等剧烈改变而失活,这一缺点阻碍了蛋白和酶的实际应用。因此,通过固定化技术来提高生物大分子的稳定性及重复使用性是十分必要的。本文将微波辅助合成法引入磁珠键合聚酰胺胺树枝分子(PAMAM)的合成过程,成功地在磁珠表面逐代生长了不同代数的PAMAM。通过单因素实验优化了微波辅助键合的条件,并通过TEM、XRD、FTIR、TGA、VSM和EA表征证明磁珠键合PAMAM的情况。实验结果证明,在微波辅助下,磁珠键合PAMAM的反应时间明显缩短,大大缩短了PAMAM的制备周期。采用戊二醛交联法将BSA共价键合到PAMAM修饰的磁珠表面。通过荧光标记技术结合共聚焦激光扫描显微镜观测BSA在磁珠表面的键合情况,UV-Vis分析和EA表征证明磁珠表层BSA的量和磁珠表层氨基数量的增长趋势。应用免疫的方法证明了磁珠表面键合的BSA的活性,并用旋光分析和HPLC分析证明了合成的磁性手性材料BSA-PMNPs具有较好的拆分手性氨基酸的效果。本文将辣根过氧化物酶(HRP)接到PAMAM修饰的磁珠上,并进行了一系列表征。通过单因素实验对酶解酚类化合物的条件进行了优化。考察了新型的固定化HRP的储存稳定性和重复使用性。选择酶解酚类化合物作为模型研究HRP的酶解机理。结果表明,固定化HRP稳定性提高,可以重复使用降低成本,并发现了通过HRP的酶解可以将有毒的酚类物质转变成世界五大通用塑料之一聚对苯氧化物的原料。本文所发展的微波辅助磁珠键合PAMAM,与传统加热方法相比,大大缩短了合成周期,提高了合成产率。并为生物大分子的连接提供了多重键合位点,提高了纳米材料的生物相容性。
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