【摘 要】
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蛋白质-无机盐杂化纳米复合材料因其具有可控的形貌,大的比表面积及良好的生物相容性,近年来逐渐得到人们的广泛关注。将蛋白质固定在无机盐上不仅可以保持蛋白质原有的基本
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蛋白质-无机盐杂化纳米复合材料因其具有可控的形貌,大的比表面积及良好的生物相容性,近年来逐渐得到人们的广泛关注。将蛋白质固定在无机盐上不仅可以保持蛋白质原有的基本结构,还可以提高其生物活性、储存稳定性及重复利用性。本论文采用温和的反应条件,简单快速制备了一系列蛋白质-无机盐杂化纳米复合材料,并成功将其作为新型的固定化酶反应器和可视化检测平台,应用于蛋白质的高效快速酶解与环境污染物的可视化检测。具体研究内容包括:第一章主要对有机-无机杂化纳米材料进行了详细综述;重点介绍了蛋白质的固定方法及固定化基质,尤其介绍了蛋白质-无机盐杂化纳米复合材料的研究进展;此外,还简要介绍了本论文的研究意义和研究内容。第二章以胰蛋白酶为有机组分,磷酸镍为无机盐组分,利用自组装技术,在水相条件下成功制备了胰蛋白酶-磷酸镍杂化纳米花。实验考察了浓度、时间、对纳米花形貌的影响,并通过扫描电镜(SEM)、红外光谱(FTIR)、能谱(EDS)、x射线衍射(XRD)等手段对该杂化纳米花的组成和结构进行了考察。在最优条件下,以苯甲酰精氨酸乙酯(BAEE)为底物,测得该纳米花中胰蛋白酶的活度为游离胰蛋白酶的207%。该材料可用于标准牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的快速酶解(~1 min);将其应用于人血清等实际样品的酶解分析,获得了满意的结果。此外,实验还制备了 Mg2+、Ba2+、Zn2+和Co2+等一系列金属磷酸盐的杂化纳米复合材料,并对蛋白质与金属离子固定化机理进行了初步探讨。第三章以牛血红蛋白(BHb)为有机组分,沸石咪唑骨架材料(ZIF-8)为无机组分,于水相条件下简易制得ZIF-8@BHb杂化纳米复合材料。利用SEM、FTIR、XRD、热重分析(TG)等表征手段对杂化纳米复合材料的形貌、结构以及形成过程进行详细地考察。此外,以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)为催化底物,对杂化纳米复合材料上的BHb进行模拟过氧化物酶活性测试,结果表明,其活性为游离BHb的423%,表现出极高的催化活性。将此材料用作可视化检测平台,可实现细胞中双氧水和废水中苯酚的检测,其肉眼检测限可达到~1.0 μM,表现出良好的应用前景。
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