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研究背景:慢性肾脏病基本病机为本虚标实,其发病之本乃为肾元衰竭,标实则为湿浊内蕴。通腑泄浊法立足于中医浊毒之病机,以清除慢性肾脏病患者体内浊毒为目的,达到保护肾脏,延缓病情进展的作用。前期研究发现通腑泄浊方有助于调节肠道菌群,减少尿毒症毒素,从而延缓慢性肾脏病的进展,但是其对肾脏的具体作用机制尚不明确。研究目的:本研究通过建立慢性肾脏病大鼠模型,以通腑泄浊方为研究对象,观察通腑泄浊方对慢性肾脏病大鼠的尿毒症毒素、尿蛋白、炎症因子、肾脏纤维化以及TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响。评价通腑泄浊方对慢性肾脏病大鼠肾功能以及肾脏纤维化的作用,探索通腑泄浊方延缓肾脏纤维化发展的可能机制。研究方法:研究一:通腑泄浊方对慢性肾脏病大鼠肾脏的保护作用将SD大鼠随机分为空白组,模型组,尿毒清组,通腑泄浊组。空白组除外,其余三组均予腺嘌呤混悬液灌胃制作慢性肾脏病动物模型,各组大鼠下午给予相应剂量药物治疗,8周后处死大鼠,检测各组大鼠血清尿素氮、肌酐、尿酸、硫酸吲哚酚以及24h尿蛋白含量。根据实验检测结果,评价通腑泄浊方对慢性肾脏病大鼠肾功能的保护作用,探究其潜在机制。研究二:通腑泄浊方对慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的影响将SD大鼠随机分为空白组,模型组,通腑泄浊组,大黄组。空白组除外,其余三组均予腺嘌呤混悬液灌胃制作慢性肾脏病动物模型,各组大鼠下午给予相应剂量药物治疗,8周后处死大鼠,取大鼠肾脏标本,分别行HE染色及Massson染色,计算胶原纤维占比,检测肾脏α-SMA、C0l-I蛋白表达情况。根据实验检测结果,评价通腑泄浊方对慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的影响。研究三:通腑泄浊方调节TGF-β1/p38MAPK通路延缓肾脏纤维化的作用将SD大鼠随机分为空白组,模型组,通腑泄浊组,大黄组。空白组除外,其余三组均予腺嘌呤混悬液灌胃制作慢性肾脏病动物模型,各组大鼠下午给予相应剂量药物治疗,8周实验结束后处死大鼠,取血清及肾脏标本,检测各大鼠血清尿素氮、肌酐、尿酸、胱抑素C、同型半胱氨酸、硫酸吲哚酚、白介素-6、转化生长因子-β1、24小时尿蛋白以及肾脏组织转化生长因子-β1、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达。根据实验检测结果,评价通腑泄浊方延缓肾脏纤维化的作用机制。研究结果:研究一:与空白组大鼠相比,模型组大鼠体重显著减轻,单肾体重比、肌酐、尿素氮、尿酸、24小时尿蛋白均上升(P<0.05)。与模型组相较,尿毒清及通腑泄浊组大鼠体重均显著上升(P<0.05),单肾体重比、尿素氮、肌酐、尿酸水平以及24小时尿蛋白降低(P<0.05);通腑泄浊组大鼠血清硫酸吲哚酚水平较模型组显著下降(P<0.05);与尿毒清组相较,通腑泄浊组尿素氮含量明显降低(P<0.05)。研究二:与空白组大鼠相较,模型组大鼠胶原纤维占比显著升高(P<0.05),肾脏α-SMA、Co1-I蛋白表达显著升高(P<0.05)。通腑泄浊组及大黄组肾脏胶原纤维占比较模型组显著降低(P<0.05);通腑泄浊组及大黄组肾脏α-SMA表达较模型组显著降低(P<0.05),而Col-I虽有所下降但是差异无统计学意义(P>0.05)。研究三:与空白组大鼠相较,模型组大鼠体重减轻,单肾体重比、血清尿素氮、肌酐、尿酸、胱抑素C、同型半胱氨酸、硫酸吲哚酚、白介素-6、TGF-β1、24小时尿蛋白均上升(P<0.05);与模型组相较,通腑泄浊组大鼠体重升高,单肾体重比、尿素氮、肌酐、尿酸、胱抑素C、同型半胱氨酸、硫酸吲哚酚、白介素-6、TGF-β1、24小时尿蛋白均明显下降(P<0.05);大黄组大鼠体重升高,尿素氮、胱抑素C、白介素-6、24小时尿蛋白明显下降(P<0.05);与通腑泄浊组相较,大黄组尿素氮、TGF-β1水平明显较高(P<0.05)。Western-blot结果显示,与空白组相较,模型组肾脏TGF-β1以及p-p38MAPK蛋白表达显著增强(P<0.01),与模型组相较,通腑泄浊组与大黄组肾脏TGF-β1、p-p38MAPK蛋白表达均明显降低(P<0.05);通腑泄浊组肾脏TGF-β1、p-p3 8MAPK蛋白表达低于大黄组,但差异不具备统计学意义(P>0.05)。结论:(1)通腑泄浊方可以保护慢性肾脏病大鼠肾功能,减少蛋白尿,减少尿毒症毒素在体内的蓄积,延缓病程进展。(2)通腑泄浊方可降低慢性肾脏病大鼠肾脏胶原纤维占比以及α-SMA表达,具有抗肾脏纤维化的作用。(3)通腑泄浊方通过调节炎症因子,减轻炎症反应;并抑制促纤维化因子以及TGF-β1/p38MAPK信号通路过度表达,来延缓肾脏纤维化。(4)与单药大黄相较,通腑泄浊方对肾功能的保护相对更优,体现了中药配伍增效之优势。