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目的：1.检测Smac与XIAP在上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP及其亲本细胞SKOV3中的表达差异。2.构建含成熟Smac片段的真核表达载体pcDNA3.1(+)/EGFP+Smac,转染上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP。3.观察转染外源性Smac基因对上皮性卵巢癌耐药细胞Smac与XIAP蛋白表达变化,探讨Smac与卵巢癌耐药及凋亡机制。方法：1.MTT法分别检测上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP和亲本细胞SKOV3的IC50,计算耐药指数。2.采用RT-PCR、Western blot方法分别从基因和蛋白水平检测卵巢癌细胞系SKOV3及其耐药细胞系SKOV3/DDP中Smac/DIABLO与XIAP的表达水平的差异。3.通过两步法RT-PCR获得成熟Smac的双链cDNA。限制性内切酶KpnI对Smac双链cDNA和质粒pcDNA3.1(+)/EGFP进行单酶切,将纯化回收的DNA和质粒的目的片断用T4DNA连接酶连接,转化Trans1-T1Phage Resistant感受态,进行质粒的扩增和测序。4.采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)/EGFP+Smac真核表达载体导入卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP。运用western blot法检测转染前后细胞内Smac与XIAP表达的变化,MTT法检测Smac表达增加后,细胞生长抑制率,观察Smac基因对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果：1. SKOV3/DDP的耐药指数为4.56693,可进行耐药实验。2.SKOV3.SKOV3/DDP细胞系中均表达Smac/DIABLO与XIAP,且SKOV3中Smac的相对含量高于SKOV3/DDP。SKOV3中XIAP的相对含量低于SKOV3/DDP。3.成功构建携带成熟Smac功能片段的真核表达载体。经测序鉴定,符合GeneBank公布的序列。4. Western blot检测转染后耐药细胞Smac蛋白表达增加,XIAP表达无明显改变。5.MTT结果转染48h与72h后细胞生长抑制率出现明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论：蛋白功能检测表明,Smac在体外培养的卵巢癌耐药细胞中表达降低,XIAP表达增加。Smac表达的上调对卵巢癌细胞XIAP表达无明显影响,但对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用。提示Smac确实促进卵巢癌细胞凋亡,但其凋亡机制并不是促进XIAP降解,而是与XIAP相互结合抑制其与caspase结合,激活caspase进而起到促凋亡作用。