新型生物农药氨苷霉素的分离工艺及其结构鉴定

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氨苷霉素(Mildiomycin)是一种新型核苷类农用抗生素,对各种植物的粉状霉菌有强烈的拮抗作用,而且对人畜无毒,具有广阔的应用前景。本文主要目的是研究用离子交换法从发酵液中提取氨苷霉素的工艺流程,制备氨苷霉素纯品,并确定其化学结构。 论文首先建立了MIL的定量分析方法。分别建立了氨苷霉素定量分析的坂口反应法和高效液相色谱法。坂口反应法快速简便,但受金属离子和精氨酸干扰,适用于分析氨苷霉素标准品。高效液相色谱法快速、准确、抗干扰能力强,适用于测定发酵液和各种分离过程中的氨苷霉素浓度。高效液相色谱条件如下:色谱柱:安捷伦Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm);流动相:含5%甲醇的0.005M柠檬酸缓冲液(pH5.8);检测波长:254nm;流速:0.7mL/min;进样量:15uL;柱温:室温。 建立了从发酵液中提取氨苷霉素的工艺流程,该流程包括如下步骤:1)发酵液预处理和固液分离:发酵液中加入草酸至pH3.0,保持30min,离心并调pH至中性,再离心或过滤得氨苷霉素母液,氨苷霉素几乎不损失;2)离子交换:以大孔阳离子交换树脂D115为介质,氨苷霉素母液调pH7.5,以1BV/h流速上柱,以2%氨水,0.5BV/h流速洗脱。重复试验表明,树脂的吸附容量为40~50mg/g dry resin,离子交换氨苷霉素的得率为80%左右;3)脱色成盐:以D750为脱色树脂,离子交换洗脱液调pH6.5,以0.5BV/h流速上柱脱色。重复试验表明,氨苷霉素的得率为90%左右,树脂处理量为150mL洗脱液/10mL湿树脂;4)沉淀:脱色液减压浓缩后,加入过量乙醇,使氨苷霉素沉淀,得到氨苷霉素粗品。整个工艺流程的氨苷霉素得率为70%左右,产品纯度为80%左右。 建立了氨苷霉素精制的方法。采用离子交换层析的方法,介质为HD-2,洗脱剂为0.3M pH8.8的硼酸锂缓冲液(含5%的甲醇)。收集活性部分,再经脱盐脱色,乙醇沉淀后,制备氨苷霉素纯品,纯度在95%以上。该产品和氨苷霉素的质谱,红外光谱,氢-核磁共振和碳-核磁共振谱图比较表明,两者为同一物质。
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