镉低富集姬松茸菌株的筛选与评价

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jamyi
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姬松茸(Agaricus blazei Murrill)又名巴西蘑菇,是一种起源于巴西的可食用蘑菇。其具有较高的营养价值和药用价值,在抗肿瘤活性、抗凋亡作用和防治心血管等方面发挥着重要的作用。有研究指出姬松茸菌丝体对重金属镉的富集能力较强,子实体中镉含量较高,易超过食用标准,导致姬松茸相关的产品发生食品安全问题。因此,探究姬松茸镉胁迫相关的生理及分子响应机制,为姬松茸重金属胁迫相关研究提供理论基础,对解决实际生产问题具有重大的意义。本文以不同品种的姬松茸菌丝体和子实体为材料,通过镉胁迫处理,分别筛出高镉富集和低镉富集的品种。测定了姬松茸菌丝体的鲜重、镉含量、富集系数等。结合转录组测序结果,分析了与镉胁迫相关的代谢通路和基因,探索了姬松茸响应镉胁迫的分子调控机制。本文研究结果主要如下:1、采用拮抗及ISSR分子标记法对11个姬松茸品种资源进行了菌株鉴定,结果表明单纯的拮抗试验不能区分所有的菌株。利用ISSR分子标记,将供试的11个菌株进一步区分为11个品种,遗传系数在0.418-0.919之间。其中J7、J8品种遗传系数在0.919,遗传背景极为相似。在本文中,J7、J8被认为是遗传背景极为相似的两个品种。2、挑选11个姬松茸菌株中J4菌株作为供试材料,在镉溶液为0 mg/L、4 mg/L、8 mg/L、12 mg/L、16 mg/L、20 mg/L时,观察了菌丝的生长速率及菌丝的形态。结果表明随着镉溶液浓度的增加,菌丝生长速率降低,长势变弱。镉溶液浓度为8 mg/L时,仅在接种点处有菌丝体萌发,且基本不再生长。当培养基中镉浓度梯度为0 mg/L、1mg/L、2 mg/L、3 mg/L、4 mg/L、5 mg/L、6 mg/L、7 mg/L、8 mg/L时,菌丝体的生长速度在镉浓度为2 mg/L的条件下较快,菌丝洁白并粗壮,故后续镉胁迫试验浓度定为2 mg/L。3、对11个材料进行液体菌丝培养试验和栽培试验,分别设置对照及2mg/L(2mg/kg)镉浓度处理。通过分析菌丝的干重、镉含量和富集系数,发现镉处理后液体培养菌丝体镉含量高于对照组,同时发现镉胁迫减少菌丝体的生物量;11个供试菌株菌丝镉含量最高的品种为J11,镉含量最低的品种为J4;通过分析镉处理后子实体的农艺性状及镉含量,发现菌盖中镉含量约为菌柄中镉含量的3倍。对照子实体产量与镉胁迫子实体产量无显著差异性,但是镉胁迫子实体镉含量远高于对照镉含量。子实体中镉含量最高的为J3,最低的为J4,产量最高的为J5,发现姬松茸镉富集在液体菌丝与子实体之间表现有差异。4、对姬松茸液体菌丝筛出来的低镉富集菌株J4和高镉富集菌株J11进行镉胁迫处理,将处理后的材料和对照组材料(未外源添加镉)进行转录组测序分析。在低富集镉品种J4中,镉胁迫的样品J4Cd与对照样品J4CK中共检测到623个差异基因,其中244个表达显著上调基因,379个表达显著下调基因。在高富集镉品种J11中,镉胁迫的样品J11Cd与对照样品J11CK中共检测到1386个差异基因,其中表达量显著上调的基因580个,显著下调的基因806个。注释结果表明,差异表达基因主要集中在类固醇生物合成、抗生素生物合成、内质网蛋白质加工、谷胱甘肽代谢等通路中。碳代谢、谷胱甘肽代谢可能在姬松茸菌丝响应镉胁迫方面起重要的作用。采用实时荧光定量技术对挑选的一些基因进行验证,发现与转录组数据结果一致,证实了差异基因表达量的准确性。
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