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目的:探索GRASP65(Golgi reassembly stacking protein 65)在JNK信号通路调节人胃癌细胞的增殖、凋亡及周期中的作用和机制。方法:首先,将高表达GRASP65的胃癌细胞株SGC7901用三条siRNA特异片段应用转染试剂进行瞬时转染,减少此胃癌细胞中GRASP65蛋白的表达量。然后,RT-qPCR及Western blot用于观察下调效果最好的片段进行后续实验。下调成功后将JNK信号通路抑制剂加入各组细胞。实验分组为阴性对照组(NC组)、阴性对照加药组(NC+SP组)、下调组(si-GRASP65组)、下调加药组(si-GRASP65+SP组)。最后,用CCK-8试剂盒检测各组细胞生长状况,流式细胞术观察各组细胞的凋亡以及周期的改变情况,每个组细胞内蛋白bcl-2、cleaved caspase 3等表达量用Western blot方法检测。结果:Western blot以及RT-qPCR的结果提示,在SGC7901细胞中,片段编号为1230(si-1230组)的siRNA对GRASP65的蛋白和mRNA表达的抑制效果最好。CCK-8实验结果表明,与NC组相比,NC+SP组细胞的增殖显著减少(P<0.001),而si-GRASP65组与si-GRASP65+SP组之间细胞增殖情况无明显差别(P>0.05)。流式细胞术指出,NC组凋亡率明显比NC+SP组低(P<0.01),而下调组加药前后的凋亡率的统计结果显示没有明显差别(P>0.05)。NC+SP组细胞阻滞于G2期的细胞数明显多于NC组(P<0.001),而si-GRASP65+SP组阻滞于G2期的细胞数明显少于NC+SP组(P<0.05)。Western blot结果表明,NC+SP组中细胞内表达的cleaved caspase 3的蛋白量比NC组高(P<0.001),si-GRASP65+SP组细胞cleaved caspase 3的蛋白表达量明显低于si-GRASP65组(P<0.01),而bcl-2的结果与之相反。GRASP65在NC+SP组中的表达量明显低于NC组(P<0.001),而在下调组与下调加药组中其表达量没有明显差别。各组细胞中P-JNK和GM130蛋白的表达变化与GRASP65一致。关于c-jun,NC+SP组的表达低于NC组(P<0.001),而si-GRASP65+SP的表达高于si-GRASP65组(P<0.05)。结论:GRASP65参与了JNK信号通路对人胃癌细胞的增殖、凋亡和周期等生物学行为的调控过程,并且是此通路中的关键因子。其机制可能是通过改变JNK的磷酸化状态,调节cleaved caspase 3、bcl-2、c-jun等蛋白表达量从而对胃癌细胞增殖、凋亡以及周期产生影响。