【摘 要】
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番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus，ToCV)，近年来在世界各地包括番茄在内的茄科重要经济作物主产区快速蔓延，严重威胁茄科重要经济作物的安全生产。ToCV侵染番茄等寄主植物会造成其出现叶片褪绿、果实变小及不均匀着色等症状，对番茄等农作物的产量和商品性造成严重的影响。ToCV编码的致病因子及其致病分子机制，目前仍鲜见报道。研究ToCV的致病分子机制，可为分析ToCV对番茄等茄科重要作物的潜在威胁提供科学依据。
采用同源重组法，构建ToCVP6基因异源表达马铃薯X病毒(Pot
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番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus，ToCV)，近年来在世界各地包括番茄在内的茄科重要经济作物主产区快速蔓延，严重威胁茄科重要经济作物的安全生产。ToCV侵染番茄等寄主植物会造成其出现叶片褪绿、果实变小及不均匀着色等症状，对番茄等农作物的产量和商品性造成严重的影响。ToCV编码的致病因子及其致病分子机制，目前仍鲜见报道。研究ToCV的致病分子机制，可为分析ToCV对番茄等茄科重要作物的潜在威胁提供科学依据。
采用同源重组法，构建ToCVP6基因异源表达马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)载体pGR107∷P6，使用农杆菌介导法浸润本氏烟野生型。30dpi，本氏烟植株内PVX异源表达P6蛋白，寄主植株不出现矮化症状，叶片出现畸形和严重斑驳的现象，但并不产生坏死斑。PVX基因组RNA定量结果表明，P6蛋白显著增加PVX基因组RNA累积。DAB染色结果表明，P6蛋白诱导本氏烟叶片细胞内H2O2累积，并且诱导内质网应激反应关键基因Bip、HSP90-2和bZIP60显著上调表达。
将pGR107∷P6载体，农杆菌介导法浸润本氏烟16C。PVX基因组RNA定量结果表明，6dpi，P6蛋白促进PVX基因组RNA累积；内质网结构观察结果表明，P6蛋白不诱导叶片细胞内质网体形成。
利用PVX载体在本氏烟16-TGS中异源表达P6基因，14dpi，本氏烟16-TGS叶片产生明显斑驳症状；在UV光下，接种叶产生GFP荧光，Westernblotting证实GFP报告基因表达。甲基化敏感内切酶MrcBC酶解本氏烟16-TGS总DNA结果表明，P6蛋白抑制本氏烟基因组水平DNA甲基化。RT-qPCR结果表明，P6蛋白诱导本氏烟16-TGSDNA甲基化途径DRM2、CMT3和AGO4基因显著下调表达。
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