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背景 酗酒已成为遍及全球的公共卫生问题,会对社会产生诸多不良影响,近年来,女性饮酒现象越来越普遍,母体孕期饮酒会严重影响胎儿的生长发育,如引起宫内缺氧、致畸形、流产、早产、低体重儿等,还可引起胎儿酒精综合征(fetal alcohol syndrome, FAS),表现为中枢神经系统异常、先天性心脏发育不良、特殊面容、生长发育迟缓等。稳定有效的呼吸是机体生命存活的前提条件。基本节律性呼吸起源的关键部位为延髓呼吸中枢的面神经后核内侧区(the medial area of nucleus retrofacialis, mNRF)。中枢性呼吸系统疾病,特别是延髓呼吸中枢的病理性改变已成为临床工作中的常见病与多发病,饮酒所引起的子代呼吸中枢功能异常也愈发多见。因此,研究孕期酒精暴露对子代延髓呼吸中枢功能的作用及其机制对相关疾病的预防和治疗有着广泛的应用前景和重要意义。目的 研究5-HT2A受体在孕期酒精暴露抑制新生大鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电活动(rhythmic respiratory discharge activity, RRDA)中的作用。方法1.清洁级Sprague-Dawley成年大鼠,雌雄比例2：1,雌鼠和雄鼠随机分为数量相等的6组：对照组和1%孕期酒精暴露组、2%孕期酒精暴露组、4%孕期酒精暴露组、8%孕期酒精暴露组、10%孕期酒精暴露组(酒精浓度为v/v),按照雌雄大鼠2：1合笼交配。对照组大鼠自由饮用纯净水,不同浓度酒精暴露组大鼠自合笼前1W至产后3d以相应浓度酒精水溶液作为唯一饮用水(自由饮用)。实验使用各组2d龄新生大鼠,制作新生大鼠离体延髓脑片,雌雄不拘。使用神经电生理技术记录并对比各组新生大鼠延髓脑片RRDA,根据反应RRDA指标的吸气时程(inspiratory time, TI)、呼吸放电积分幅度(integral amplitude, IA)、呼吸频率(respiratory frequency,RF)变化,明确孕期酒精暴露对新生大鼠RRDA作用的最适酒精浓度。2.为研究5-HT2A受体是否参与孕期酒精暴露对新生大鼠RRDA的作用,实验分为6组：对照组,孕期酒精暴露组,对照DOI组,孕期酒精暴露DOI组,对照酮舍林组,孕期酒精暴露酮舍林组。3.采用Western Blot技术检测孕期酒精暴露对新生大鼠mNRF区神经元5-HT2A受体表达的影响。4.采用qRT-PCR技术检测孕期酒精暴露对新生大鼠mNRF区神经元5-HT2A受体mRNA表达影响。结果1.对照组和1%-8%孕期酒精暴露组延髓脑片RRDA 60min内稳定无衰减,实验模型稳定可靠。与对照组相比,1%孕期酒精暴露组,2%孕期酒精暴露组变化无明显差异(P>0.05)；随着酒精浓度的增加,4%-10%孕期酒精暴露组新生大鼠RRDA逐渐减弱,TI缩短、IA减弱、RF下降(P<0.05),10%孕期酒精暴露组弱于8%孕期酒精暴露组,但RRDA节律不规整,因此,本研究选择8%酒精作为孕期酒精暴露作用的最适浓度。2.5-HT2A受体特异性激动剂DOI对孕期酒精暴露组和对照组脑片放电都有兴奋作用,孕期酒精暴露组兴奋效果弱于对照组；5-HT2A受体特异性拮抗剂酮舍林对孕期酒精暴露组和对照组脑片放电都有抑制作用,孕期酒精暴露组抑制效果弱于对照组。3.随着酒精浓度的增加,4%、8%孕期酒精暴露组5-HT2A受体在新生大鼠延髓呼吸中枢mNRF区神经元表达水平逐渐下调(P<0.05)。4.经qRT-PCR检测8%孕期酒精暴露组5-HT2A受体mRNA在新生大鼠延髓呼吸中枢mNRF区神经元表达水平下调(P<0.05)。结论1.孕期大鼠酒精暴露呈剂量反应性抑制新生大鼠延髓脑片RRDA,降低5-HT2A受体对RRDA的调节作用。2.孕期大鼠酒精暴露下调5-HT2A受体蛋白和mRNA表达,这可能是孕期酒精暴露抑制RRDA的原因之一。