论文部分内容阅读
全球水产养殖业发展迅猛,每年为全球29亿人提供15%的动物蛋白,但每年因水产病害而导致的损失十分巨大。作为水产养殖中最普遍的寄生虫病害之一,指环虫病每年都给水产业造成巨大的经济损失。目前最有效的治疗指环虫病的药物为曲托珠利、甲苯咪唑和吡喹酮等,但是由于这些化学药物过量和长时间的使用,导致了寄生虫严重的耐药性、生态环境的破坏以及药物残留等食品安全问题的频发。中草药是潜在的渔药替代药,因其毒副作用小、不存在抗药性、不会污染环境、对水产动物安全等特点而受到广泛关注,但由于中草药成分复杂,治疗指环虫病时的使用量较大,目前还无法与化学药物的杀虫活性相提并论。如果能从中草药中分离得到杀灭鱼类指环虫的化合物,进一步通过活性评估及构效关系研究提高杀虫活性降低毒性,这不仅能大大降低中草药的用量,同时也为新型无公害渔药创制提供新思路和模版,具有重要的应用前景。本研究以此为目的展开了杀虫中草药的筛选、杀虫中草药活性部位的研究、杀虫活性成分的跟踪分离等工作,结合化学技术成功分离得到了活性单体化合物,同时通过波谱分析,得到了此化合物的结构,最后对此化合物作了金鱼的急性毒性评价。以下为本论文取得的试验成果:1.42种中草药甲醇提取物对金鱼指环虫杀灭活性的研究。本试验采用有机溶剂甲醇直接提取中草药粉末的方法,对提取物进行在体杀虫活性检测,结果显示,肉桂、乌药、土荆皮3种中草药甲醇提取物在200mg/L、40mg/L和100mg/L的浓度下杀虫率达到100%,且在这些浓度下对金鱼是安全的。2.肉桂、乌药、土荆皮杀灭鱼类指环虫活性部位的研究。本试验采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、水分别对3种中草药样品进行提取,并对它们的不同溶剂提取物进行在体杀虫活性检测,试验结果显示:肉桂的甲醇提取物在30mg/L浓度下杀虫率达到100%且对金鱼无毒性,EC50值为12.25mg/L,为其杀虫的最佳活性部位;乌药的甲醇提取物在60mg/L的浓度下表现出100%的杀虫活性且未对金鱼表现出毒性,EC50值为23.53mg/L,为其最佳杀虫活性部位;土荆皮乙酸乙酯提取物在浓度为50mg/L时表现出100%的杀虫活性,其EC50值为17.10mg/L,对金鱼无毒性,是最佳杀虫活性部位。3.土荆皮杀灭鱼类指环虫活性成分的跟踪分离和结构鉴定。土荆皮用甲醇提取后得浸膏,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行固液萃取,得到土荆皮的乙酸乙酯萃取物,通过柱层析、凝胶过滤层析等分离方法跟踪分离活性单体,最后反复重结晶得到杀虫活性单体化合物Ⅰ,其在15mg/L的浓度下杀虫率达到最高的93.1%并未造成金鱼死亡,根据理化性质和波谱分析结果,鉴定此化合物为(+)-表儿茶素(EPICATECHIN)。4.(+)-表儿茶素对健康金鱼的急性毒性试验结果表明:(+)-表儿茶素在20mg/L时金鱼的死亡率为20%,30mg/L时金鱼的死亡率为60%,40mg/L时金鱼的死亡率为80%,50mg/L时金鱼死亡率达到100%,其48h的LC50和LC90值为27.447mg/L和42.532mg/L。本研究通过筛选试验、活性部位试验、活性追踪分离试验成功的从杀虫中草药土荆皮中分离得到活性化合物,波谱分析结果鉴定其为(+)-表儿茶素,希望能开发为一种新型的植物源渔药用于指环虫病的防治。