脂质体介导重组人血管内皮细胞生长抑制因子基因转染抑制角膜新生血管的实验研究

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目的: 探讨以阳离子脂质体介导重组人血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI151)基因转移对角膜新生血管的抑制作用。 方法: 1.自行构建真核表达的重组人血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI151)基因,并检测重组基因的正确性; 2.体外培养人脐静脉血管内皮细胞(CRL-2480细胞),分别用阳离子脂质体介导VEGI151重组质粒(pcDNA4-VEGI151)和空白载体质粒(pcDNA4)进行转染,并设立脂质体对照及空白对照。分别在转染后24、48及72小时通过对细胞形态的观察、VEGI151基因表达蛋白的Western-blotting检测和噻唑蓝(MTT)法观察转染后不同时相阳离子脂质体介导的重组VEGI151基因转移对CRL-2480细胞的抑制作用。 3.新西兰大白兔40只,角膜缝线法制作角膜新生血管模型,随机分为4组:A组:缝线后于上方近角膜缘处结膜下注射290μl阳离子脂质体与重组人VEGI151的混合液,共10只兔10只眼;B组:同样部位注射290μl阳离子脂质体与空白质粒的混合液,共10只兔10只眼;C组:同样部位注射290μl阳离子脂质体,共10只兔10只眼;D组:同样部位注射290μl生理盐水,共10只兔10只眼。模型建立后每天在裂隙灯显微镜下观察各组角膜新生血管的生长情况,并通过公式A=C/12×3.1416[r2-(r-L)2]计算角膜新生血管的面积。同时于第3、7、14和21天取出角膜行组织病理学检查、通过免疫组织化学方法检测角膜组织中VEGI基因的表达和新生血管的抑制情况。
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