野油菜黄单胞菌hrp基因簇的功能鉴定和表达调控分析

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野油菜黄单胞菌野油菜致病变种是一种能在全球范围内引起所有十字花科植物黑腐病的重要病原细菌。hrp基因簇编码的Ⅲ型分泌系统(TTSS)在动植物病原细菌和寄主互作过程中起着极其重要的作用。尽管组装TTSS的蛋白保守性很高,每一种病原菌仍有一些Ⅲ型蛋白同源性不高。为研究野油菜黄单胞菌野油菜致病变种hrp基因编码的蛋白的功能,用转座子Tn5gusA5诱变其野生型菌株Xcc 8004,获得一系列hrp基因的Tn5插入突变体,对这些突变体的致病性、胞外酶、胞外多糖产量等表型进行检测。研究发现,hrp或hrc基因的任一突变,致病性都完全或大部分上丧失,而hpa基因突变体致病性不受影响。利用同源标记置换构建了整个hrp基因簇(约23kb)的缺失突变体Xcc 8004△27,利用自杀质粒pT18mob作为同源单交换整合质粒,对Xcc 8004△27的hrpG进行了突变。研究发现,不含hrp基因簇的8004△27仍然具有部分致病性,但将其hrpG突变后致病性完全丧失。推测hrp基因簇内存在抑制另一致病系统的基因。为研究hrp基因簇的调控,构建了hrp基因Tn5正向插入突变体的hrpG双突变体,在植物诱导培养基XVM2上检测hrpG突变前后GUS酶活变化。研究发现,Xcc 8004的hpa2、hrpB1、hrcV、hrpD6、hrpE、conserved hypothetical genes、hrpF以及hrpX等hrp基因受hrpG基因调控。
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