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第一部分:糖尿病肾病关键ce RNA网络构建分析及验证目的检测糖尿病肾病小鼠差异表达的m RNA与lncRNA,构建糖尿病肾病关键ce RNA相互作用网络;筛选可能参与糖尿病肾病系膜增生的关键ce RNA对。方法通过高通量测序技术,获得在糖尿病肾病小鼠肾脏组织中差异表达的m RNA及lncRNA;通过Bio Mart去除在ENSEMBLE数据库中未收录的RNA;通过Mi Randa及Star Base数据库预测糖尿病肾病lncRNA-miRNA-m RNA相互作用网络;利用hypergeometric test构建糖尿病肾病差异ce RNA网络、KEGG及GO分析差异ce RNA网络;分析中心性参数(Degree和betweenness),构建糖尿病肾病关键ce RNA网络;应用q RT-PCR检测关键ce RNA网络在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高低糖培养系膜细胞中的表达。结果应用二代测序技术,得到差异表达m RNA及lncRNA,通过hypergeometric test保留了具有显著共享关系的相互作用对,在前15%的degree与betweenness的交集有中3个lncRNA和5个m RNA,m RNA Trim11与lncRNA H2k2在组织细胞表达一致,二者共享的miRNA中miR-449a与miR-449b的表达符合ce RNA原理。结论糖尿病肾病关键ce RNA相互作用网络中的H2k2/miR-449a/b/Trim11可能参与糖尿病肾病系膜增生。第二部分:lncRNA H2k2的差异表达特征及靶向miR-449a/b对糖尿病肾病小鼠肾系膜细胞增殖的影响目的探讨lncRNA H2k2靶向miR-449a或miR-449b对高低糖培养的肾小球系膜细胞的增殖影响。方法运用原位杂交(FISH)技术及核质分离RNA的qRT-PCR,检测H2k2在肾系膜细胞的亚细胞分布;q RT-PCR检测在高低糖培养的系膜细胞中转染小干扰RNA si H2k2.1、si H2k2.2及si H2k2.3或lncRNA H2k2过表达质粒H2k2(+)后沉默或过表达效率;5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测流式细胞术、Western Blot检测在高低糖培养的系膜细胞中转染si H2k2或H2k2(+)及miR-449a/b的mimics或inhibitor后对系膜细胞增殖的影响;双荧光素酶实验验证miR-449a/b与H2k2的靶向作用;q RT-PCR检测上下调H2k2或上下调miR-449a/b后RNA的表达。结果lncRNA H2k2在系膜细胞细胞质及细胞核均有分布,以细胞质为主;在低糖培养的系膜细胞中过表达H2k2及抑制miR-449a/b后,H2k2上调200倍,系膜细胞的增殖增加;G0/G1期细胞减少,S期细胞增加,细胞周期阻滞在S期;周期蛋白Cyclin D1表达增加;高糖培养的系膜细胞中沉默H2k2或过表达miR-449a/b后,si H2k2.1、si H2k2.2与si H2k2.3均可以抑制H2k2的表达,其中si H2k2.3抑制效率最好,H2k2表达下降70%;高糖培养的系膜细胞的增殖减少,G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,Cyclin D1减少。结论lncRNA H2k2调节系膜细胞增殖;H2k2与miR-449a/b具有靶向结合关系;miR-449a/b调节系膜细胞增殖。第三部分:lncRNA H2k2通过miR-449a/b及Trim11-Mek/Erk信号途径调控高糖培养的肾小球系膜细胞的增殖研究。目的探讨lncRNA H2k2靶向miR-449a或miR-449b通过Trim11/Mek/Erk信号途径影响高糖培养的肾小球系膜细胞的增殖研究。方法生物信息学预测miR-449a/b与Trim11的结合位点;双荧光素酶实验验证miR-449a/b与Trim11的靶向作用;q RT-PCR检测上下调H2k2或上下调miR-449a/b后Trim11的表达;Western Blot检测上下调H2k2或上下调miR-449a/b后Trim11、细胞周期蛋白Cyclin D1、Mek、Eek信号通路表达;Ed U检测miR-449a/b的mimics或inhibitor后对系膜细胞增殖的影响,H2k2协同作用对肾小球系膜细胞的增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-449a/b对系膜细胞周期的影响;Western blot及Ed U检测Mek信号通路抑制剂U0126或抑制trim11后H2k2对系膜细胞增殖的影响。结果miR-449a/b通过直接靶向Trim11 3′UTR区;在高糖培养的系膜细胞中过表达miR-449a/b及H2k2,系膜细胞的增殖减少,Trim11蛋白表达下降,磷酸化Mek1/2、Eek1/2减少;在低糖培养的系膜细胞沉默miR-449a/b,H2k2升高,细胞的增殖增加,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,Cyclin D1增加,Trim11蛋白表达升高,磷酸化Mek1/2、Eek1/2增加。结论lncRNA H2k2通过miR-449a/b可抑制系膜细胞增殖,其机制可能与抑制靶基因Trim11影响Mek、Erk的表达有关。