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鼠bcl-2α基因在哺乳动物细胞中的表达 无论在生理还是在病理状态下,bcl-2原癌基因都是关键的调控基因。其异常表达与许多疾病的发生发展有关,与肿瘤发生发展尤为密切,一般认为bcl-2通过抑制诱导凋亡的信号而在肿瘤发生中起作用。Bcl-2还可防止或延迟由γ-辐射,糖皮质激素,热休克和多种化疗药物所诱导的凋亡,并且有研究表明bcl-2可参与IL-2R介导的信号传导,还可协同c-myc或p56Ick共同激发细胞增殖。然而关于bcl-2如何作用和在什么环节上发挥作用,目前还不太清楚。因此,对bcl-2作用机制的研究是一关键。构建bcl-2表达细胞模型,是研究bcl-2的一个重要手段。我们通过细胞工程及基因工程技术构建了携带mbcl-2α基因真核表达载体,并将其导入哺乳动物细胞中,建立了mbcl-2α表达细胞模型且研究了mbcl-2α抗凋亡作用及其机制。 第一部分 含鼠mBCL-2α基因的真核表达载体的构建 目的 构建携带鼠bcl-2α基因的真核表达载体,为进一步建立mBCL-2α表达细胞模型作准备。方法 设计一对特异引物,以含mbcl-2α基因的载体pORF-mbcl-2α为模板,PCR扩增出mbcl-2α目的片段,克隆至真核表达载体pTracer-EF及pcDNA3.0中。结果PCR产物电泳结果和DNA序列分析均证明所克隆的基因为mbcl-2α。结论 成功构建了含mbc1-2α基因的重组真核表达载体,为进一步研究mbcl-2α基因的生物学功能奠定了基础。