该文对基因工程菌毕赤酵母表达外源蛋白猪胰岛素前体(PIP)的发酵系统进行了较深入的研究.在摇瓶实验中,研究了菌株的生长特性,确定了菌株的最佳生长和表达条件;通过降低环境pH,添加蛋白水解酶的抑制剂(EDTA)和竞争性底物(蛋白胨、精氨酸、丙氨酸等),可以缓解发酵后期蛋白的降解现象.在50L多参数全自动发酵罐实验中,分析了毕赤酵母在不同发酵阶段利用甘油和甲醇的生理代谢参数变化特征,用于指导PIP发酵过程的优化.在甲醇诱导阶段,利用指数流加策略控制比生长速率在0.016h<-1>,从而达到提高外源蛋白表达水平的目的.在5L发酵罐上以甲醇为限制性碳源进行恒化培养及动力学研究.研究表明重组毕赤酵母在表达相生长符合Monod方程,即μ=0.113S/(3.33+S).在此基础上建立了毕赤酵母表达阶段基于化学计量学的代谢流分析模型,结果表明磷酸戊糖途径通量的增强、TCA循环中用于生物合成比例的增大是外源蛋白产率增加的原因,从而从定量角度理解菌体细胞代谢流的变化规律.