背景 目前临床所见消化道恶性肿瘤中,胃癌是发病率最高的,同时胃癌死亡率位居全球第三位。胃癌在我国发病率位居前列,近年胃癌死亡率依然位于前五位。随着外科技术、化疗方式、放疗以及分子靶向治疗的进展,近年来胃癌预后得到了改善。但胃癌的长期预后仍然不佳,进展期胃癌的5年生存率低于40%。Lin28B蛋白是Lin28的同源物,是最初发现于线虫中的一个高度保守的小RNA结合蛋白。Lin28B结构包括一对能够结合RNA的独特的RNA联结模体-冷休克结构域和一对反向的CCHC锌指结构域。研究发现Lin28是在胚胎和胚胎干细胞高表达,正常成人组织中低表达,这袁明Lin28可能在胚胎发育过程中的对细胞增殖和分化起关键作用。Lin28B促进恶变,其表达与多种类型的肿瘤,包括肝癌,肾母细胞瘤,卵巢癌和生殖细胞肿瘤的晚期阶段相关。它在各种肿瘤如肝细胞癌和结肠直肠癌高表达。Lin28的过度表达已被证明促进肿瘤细胞增殖。Lin28高表达是肝癌预后不良因素,Lin28B显著与结直肠癌淋巴结转移有关。小分子(microRNA,miRNA)是一种小分子非编码RNA,约22个核苷酸长,其通过反义机制抑制靶信使核糖核酸。近来越来越多的证据表明,miRNA作为肿瘤抑制或致癌者参与肿瘤的发生和发展。miRNA Let-7最初在线虫中被发现,作为异时性基因促进线虫幼虫期到成虫的过渡。对Let-7的进一步研究表明其在细胞增殖,分化,凋亡,代谢均有功能。研究表明Let-7的水平在人肿瘤中降低,而且其缺失或下调能够与肿瘤侵袭性和临床预后差相光。另外有体内研究表明Let-7的异常表达能够减少化疗抵抗和癌细胞侵袭,抑制人肺癌生长。在分子水平上,Lin28是Let-7生物合成的抑制刺。Lin28B通过作用于Let-7的成熟的过程和细胞分化来调节Let-7家族的成员。已有研究报道Lin28作为调节器可结合Let-7的前体1niRNA阻止胚胎干细胞的成熟。Let-7的这种特殊的功能在从人成纤维细胞形成诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS cells)的过程中可提高细胞的形成效率。一些研究也已经表明Lin28和Let-7之间的关联作用,特别是细胞分化和增殖的过程中。然而既往对胃癌的研究中,Lin28B/Let-7调控环在胃癌中是否存在并没有确切研究结果,同时Lin28B/Let-7调控环对于胃癌具体进展的影响也无明确的结论。本研究的目的是通过以下实验,明确Lin28B/Let-7调控环在胃癌中存在,并进一步通过体内和体外研究探索其对胃癌发展的影响。目的 1.分别在胃癌细胞系和胃癌组织中,检测Lin28B以及Let-7的表达,分析其是否存在相关性;2.明确Lin28B/Let-7调控环在胃癌细胞中的存在；3.在胃癌细胞中过表达Let-7,观察其对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响;4.观察胃癌细胞内过表达Let-7对化疗药物5-氟尿嘧啶敏感性的变化;5.观察过表达Let-7对裸鼠人胃癌皮下移植瘤生长的影响。方法 1.通过RT-PCR和Western Blot方法检测胃癌肿瘤组织样本及正常对照组织中Lin28B表达水平的差异;通过qRT-PCR方法检测胃癌肿瘤组织样本及正常对照组织中Let-7表达水平的差异;通过利用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)分选胃癌细胞系BGC-823中CD133+/CD44+的细胞,检测其中Lin28B和Let-7表达水平。2.采用慢病毒转染方法,将Let-7转染入BGC-823细胞中,然后检测Lin28B表达水平。3.采用CCK-8法检测过表达Let-7对BGC-823细胞增殖的影响。4.采用CCK-8法检测BGC-823细胞和转染Let-7后BGC-823细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性。5.细胞成球实验评价Let-7对BGC-823细胞分化能力的影响。6.裸鼠成瘤实验评价过表达Let-7对BGC-823细胞体内成瘤能力的影响。结果1.Lin28B和Let-7在胃癌组织和癌旁正常组织中均存在;Let-7在胃癌肿瘤组织中表达水平较癌旁正常组织显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);Lin28B在胃癌肿瘤组织中表达水平较癌旁正常组织显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.在的胃癌细胞系BGC-823发现Lin28B和Let-7均有衰达,且CD133+/CD44+和 CD133-/CD44-细胞中其表达有差异。3.Lin28B和Let-7在胃癌组织中的表达呈负相关。4.在胃癌细胞系BGC-823转染Let-7后,Lin28B的表达显著下调(P<0.05)。5.采用CCK-8法检测过表达Let-7对BGC-823细胞增殖的影响,结果表明过表达Let-7抑制BGC-823细胞增殖。6.采用CCK-8法检测药物细胞毒性,结果显示过表达Let-7提高胃癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。7.采用流式细胞仪检测细胞周期显示过表达Let-7并不改变BGC-823细胞周期。8.超低吸附培养板细胞成球实验显示过表达Let-7降低BGC-823细胞成球能力。9.裸鼠成瘤实验显示过表达Let-7显著抑制BGC-823细胞体内成瘤能力。结论1.研究发现Lin28B和Let-7在胃癌细胞系有表达,在胃癌组织中也均有表达。Lin28B在胃癌组织中的表达明显高于正常的胃粘膜组织;Let-7在胃癌组织中的表达明显低于正常的胃粘膜组织。同时发现Lin28B和Let-7在胃癌组织中的表达呈负相关。2.体外研究发现,在胃癌细胞中存在Lin28B和Let-7调控环路,Let-7升高会抑制Lin28B的表达。3.体内和体外研究发现,Let-7抑制胃癌细胞增殖;Let-7能够提高胃癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性；Let-7并不改变胃癌细胞周期;Let-7能够抑制胃癌细胞的干性分化能力;Let-7能够抑制胃癌细胞体内成瘤能力。