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海甘蓝(Crambe abyssinica)属于十字花科,是有发展前景的新型高芥酸油料作物和植物蛋白源,其种子含油量为30-45%,其中55-60%是芥酸。由于海甘蓝是自花授粉植物,其油料非食用而是作为工业应用,因而可以通过基因改造来优化其农艺性状而不用担心与外界植物如油菜等传粉而引起的问题,但是目前还没有关于海甘蓝再生与转化体系的报道。
本实验以两个高芥酸海甘蓝品种Charlotte和Galactica作为实验材料,对海甘蓝Charlotte下胚轴的再生与转化体系进行了初步研究,并对不同激素和硝酸银浓度的培养基组合对海甘蓝下胚轴再生率的影响做了方差分析,结果显示在所有不同处理中,最高再生率达到21.9%。经过方差分析,发现海甘蓝下胚轴对不同浓度的AgNO3、NAA和TDZ的处理的差异是显著的,并对各个处理的差异显著性用LSD法(最小显著差数法)进行了多重比较;而用经不同浓度的激素BA和ZT对海甘蓝下胚轴再生率影响的差异是不显著的。
在转化试验中,用含有相同载体pSCV1.6的6个不同农杆菌菌株对海甘蓝Galactica下胚轴进行了转化,结果显示经不同农杆菌转化后,海甘蓝下胚轴的再生率相差不大,再生率在5.5-7.4%之间,但在转化后不同时期经过GUS染色检测后发现,经农杆菌EHA101、EHA105、AGL-1和pGV3101转化后的外植体经GUS染色后从所产生的蓝色斑点的大小以及颜色深浅上看,这4个农杆菌要比农杆菌GV2260和GV3850的感染能力强;而且经农杆菌pGV3850转化后,所得的再生植株无一在以后的筛选培养基上存活。以在后期筛选再生植株成活率来看,经AGL-1转化后所得植株经筛选后成活率最高。对所有这些在筛选培养基上成活并稳定的再生植株进行GUS和PCR检测,发现大部分再生植株检测结果为阳性。