鲤鱼卵卵黄高磷蛋白的分离纯化和性质研究

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我国是水产资源大国,水产品加工日新月异,然而对鱼副产物的精深加工还不多,鱼卵是鱼副产物的一种。本文全面分析了鲤鱼卵的成分组成;用两种方法分离鲤鱼卵卵黄高磷蛋白(Phosvitin,Pv),对其性质进行研究,比较了两种方法的异同,以期为鲤鱼卵的精深加工提供部分理论依据。研究结果如下:鲤鱼卵含水分61.80%、蛋白质26.70%、脂肪10.10%、灰分1.35%;赖氨酸(Lys)和甲硫氨酸(Met)含量充足,限制性氨基酸是色氨酸(Trp)、苏氨酸(Thr)和亮氨酸(Leu); SFA:MUFA:PUFA≈1:1:1,是理想的膳食脂肪酸构成比例,含EPA1.26%, DHA11.00%。采用盐溶法提取得到鲤鱼Pv粗提物,Native-PAGE显示为P1、P2、P3组分,磷蛋白染色检测显示P2、P3条带呈染色阳性,为Pv,分子量分别为34kDa和16kDa,通过膜分离的方法纯化鲤鱼Pv。Pv亚基分子量分别为15、17.7、20、33、96和98kDa。对纯化的鲤鱼Pv进行基础研究结果显示其氮含量为11.74%、磷含量为4.28%,氮磷含量比值为6.07;在201nm、257.8nm处产生吸收峰;丝氨酸含量占总氨基酸含量的24.1%。通过葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)过滤层析的方法,分离得到F1、F2、F3三种组分,经糖蛋白、脂蛋白、磷蛋白染色检测,得出结论:F1为卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin, Lv),F2为Pv,F3为一种小分子糖蛋白。F2分子量大小为34kDa,与盐溶法提取的P2同为鲤鱼Pv。对比盐溶法和葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)过滤层析方法分离鲤鱼卵Pv的效果发现:采用盐溶法的提取方法分离鲤鱼Pv能够得到较为全面的鲤鱼卵Pv成分,操作简单、一次性可试验量大(获取更多目的蛋白),但是采用这种方法得到的是鲤鱼Pv粗提物,仍需根据鲤鱼卵Pv分子量大小进行超滤以得到纯的鲤鱼卵Pv;葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)过滤层析方法分离得到一种鲤鱼Pv纯物质,相比盐溶法提取法不需再纯化,分析简便快捷,但是得到的鲤鱼Pv成分不全面,且试验每次上样量小,重复试验和收集使速度较慢。综合考虑以上因素,在研究鲤鱼卵Pv时,宜采用盐溶法的提取方法。
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