准种(quasispecies)是由Eigen首先提出的用于描述同种生物遗传异质性的概念。在病毒学研究领域，准种被用于表示感染个体内同种病毒的遗传异质性(genetic heterogeneity)。准种特性已经被证实是RNA病毒具有的一种普遍的生物学特性。有关HBV准种特性的研究近年也逐渐受到重视。有学者指出，关于HBV准种形成的原因及其与临床表现之间相互关系是研究HBV准种特性重要意义所在；而关于机体的免疫压力以及抗病毒药物的选择作用在HBV准种形成过程中的地位和作用，以及HBV准种的形成与急性HBV感染的慢性化，慢性HBV感染的临床转归之间相互关系的研究，将为探索抗HBV感染的治疗方法提供重要的线索。HBV具有的准种特性可能是引起乙型肝炎慢性化和抗病毒治疗失败的一个非常重要的病毒学因素。 慢性乙型肝炎是否发病及发病的严重程度与病毒因素和宿主因素的共同作用有关。目前普遍认为慢性乙型肝炎患者的肝细胞损害是免疫介导的。乙型肝炎核心抗原(HBcAg)由HBV C基因编码，是免疫攻击的靶抗原，细胞毒性T淋巴细胞(CTL)可促使表达靶抗原的感染肝细胞死亡。C基因转录调控区存在于前C基因上游的基本核心启动子(basal core promoter,BCP)内，该区突变可直接对C基因的转录及基因编码产物的表达产生影响。前C基因的热点突变ntG1896A突变(A83突变)可导致原有的由TGG编码的色氨酸转换为终止密码子(TAG)，从翻译水平造成HBeAg合成中断。由于CTL在免疫识别上并不能区分HBcAg和HBeAg，因此HBeAg可以缓和CTL对感染肝细胞的免疫攻击。而HBeAg的缺失则可能引起过强的免疫反应从而导致肝细胞的免疫损伤进而造成慢性肝炎急性发病乃至重型肝炎。C基因比前C基因具有更大的变异性。C基因编码CD4+T细胞表位、CTL表位、B细胞表位，这些区域的变异均可能对宿主的病情转归产生影响。因此HBV前C／C基因及BCP区是宿主对病毒免疫应答的焦点，该区变异引起原有肝炎加重来自乙型肝炎重型化已经得到较多研究结果的支持。但目前对HBV基因变异与宿主临床表型关系的研究主要采用PCR-序列分析的方法检测单个变异株或突变序列以及对比这些突变在不同背景患者间的差异，理论上检出的变异是HBV种群的优势株，但未能反映出病毒准种演变与宿主临床表型变化的动态第三军医大学硕士学位论文关系。. 为了初步探讨HBV前C/C基因及C启动子区准种与宿主肝病活动间的关系，本研究选择了1例慢性乙型肝炎患者初次发病时、好转时、发生重型肝炎时、重型肝炎好转后2月、4月的共5份血清样本进行研究，采用PCR一T载体克隆一CSGE变异检测一核酸序列分析的实验流程，PCR扩增和克隆了以上血清样本的HBV前C/c基因及BCP一ORF区片断，并从每份样本的克隆产物中随机选出33个克隆进行CSGE检测，对CSGE筛选出的不同克隆进行序列分析，展示了该慢性乙型肝炎患者血清HBV准种随肝病活动的动态变化，初步探讨了HBV前C/C基因及C启动子区准种随宿主肝病活动的互动关系。 主要实验结果: 用PCR一克隆一CSGE检测一核酸序列分析的方法对1例慢性乙型肝炎患者急性发病时、好转时、发生重型肝炎时、重型肝炎好转后2月、好转后4月的共5份血清样本进行纵向的动态研究，主要实验结果为: 1.该患者血清HBV前C/c基因及C启动子区存在准种现象，且该区准种随宿主肝病活动情况不同发生了动态变化，慢性肝炎急性发作及重型肝炎发病时该区准种复杂性低，且不同克隆型毒株间的差异(异质性)小，而肝病好转、HBV呈持续性感染时该区准种复杂性及异质性高，且随时间推移逐渐增高。 2.该慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/C基因及C启动子区准种的优势株和弱势株随病情变化存在相互消长的现象，且原有优势株被新的优势株取代后并没有消失，而是以弱势株的形式继续存在。 3.患者血清HBV前C/C基因及BCP区准种从最初慢性乙型肝炎发病到重型肝炎好转后4月的病程中其优势株序列的同源性发生了改变。 4.慢性肝炎急性发作及重型肝炎发病时，该患者血清HBV优势毒株前C基因发生了G1896A突变，而HBv呈慢性持续感染时血清HBv优势毒株前C基因未发生G1896A突变。 5.C基因ePST突变的动态变化情况与G1896A突变高度一致，cL60V和esl55T突变的变化也表现出类似特点。 6.5份血清样本的大部分HBV毒株均含有C启动子A1762T/G1764A突变。 结论: 1.慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/C基因及BCP区存在准种现象，且该区准种随宿主病程进展可发生动态变化，患者慢性乙型肝炎及重型肝炎发病时该区准种复第三军医大学硕士学位论文杂性及异质性低，而病情好转后该区准种复杂性及异质性升高，且随时间的累积不断上升。 2.慢性乙型肝炎患者血清HBv前C/C基因及BCP区准种的优势株和弱势株可随病情变化而相互消长。 3.慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/C基因及BCP区准种可随患者病情演变而发生漂变。 4.G1896A、cPST、cL6Ov和csl55T突变可能与宿主慢性乙型肝炎及重型肝炎发病有关，A1762T/G1764A突变可能与慢性乙型肝炎患者肝病发作无关。