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华南忍冬Lonicera confusa DC.俗称山银花,又称大银花、土银花,收载于《中国药典》2005年版(一部),为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)植物,具有清热解毒,凉散风热的功效,临床用于治疗呼吸道感染、细菌性感染、急性扁桃腺炎、高热症、梅核气(慢性咽炎)、小儿肺炎、腮腺炎等40多个病种。临床应用复方金银花制剂的频率较高,并被广泛运用于食品、饮料、药品、保健品、日用化工等方面,如牙膏、袋泡茶、沐浴液、口香糖等。随着山银花开发利用的不断扩展,市场需求量激增,致使野生资源急剧减少。在广东,野生华南忍冬种子难以收集,在野生转家栽的过程中,种苗主要来源于野生资源的扦插繁殖,成活率低且生长周期长,且种质没有经过系统的筛选与优化,植株生长参差不齐,种苗优劣兼有,不利手生产上统一管理,对山锒花药材的大面积规范化种植生产造成严重的影响。因此,开展华南忍冬(山银花)种苗离体快繁技术的研究,对山银花中药材的规范化、规模化生产及其优良种质种苗的繁育和可持续利用有重要的实践意义,并为华南忍冬(山银花)种质的选育和种质资源的保存奠定了基础。本文的主要研究内容如下:1国内外研究综述查阅了大量与本研究相关的国内外文献资料,归纳总结了华南忍冬种质资源的研究现状,内容涵盖了药用沿革、资源调查、化学成分及药理药效、组培苗品质评价等方面的研究进展,并概述了忍冬属药用植物离体培养的研究进展。2华南忍冬离体培养体系建立的研究不同消毒方式对获得无菌苗的影响——考察了外植体种类、取样季节、天气条件和对不同处理方式对华南忍冬外植体消毒效果的影响,并对华南忍冬外植体消毒灭菌条件进行了优化和筛选。结果表明:半木质化的嫩枝是比较合适灭菌的材料,在7~11月进行取样,现采现做效果最好,阴雨天气会影响消毒效果,初代培养灭菌条件最佳组合为:75%酒精浓度15s,0.2%升汞消毒9min。初代丛芽诱导试验——考察了外植体种类及不同浓度的生长素对华南忍冬初代丛芽诱导的影响,并通过正交试验考察了不同的激素组合对丛芽诱导的影响。结果表明:半木质化的嫩枝诱导效果较好;6-BA为1.0 mg·L-1时IBA浓度0.2mg·L-1的诱导效果最好;不同激素对丛芽诱导率的影响不同,3种激素的影响顺序为IBA>6-BA>NAA。丛芽增殖试验——考察了激素的种类、浓度、配比及多种激素组合对华南忍冬继代丛芽增殖的影响,同时进行了基本培养基矿质营养元素含量及外植体顶芽对其丛芽增殖影响的研究。结果表明:华南忍冬丛芽增殖培养适宜的基本培养基大量营养元素含量是硝酸铵为0,磷酸二氢钾、硝酸钾、氯化钙、磷酸镁分别减半。外植体的选择部分,有顶芽的组培苗增殖效果最好。细胞分裂素6-BA对华南忍冬丛芽增殖影响较为明显,增殖系数最高的培养基为1/MS+6-BA1.0 mg·L-1+IBA0.2 mg·L-1。最适的丛芽增殖培养条件为:用有顶芽的组培苗为外植体,培养基为改良MS+6-BA1.0 mg·L-1+IBA0.02 mg·L-1。生根试验——考察了激素的种类及浓度、活性炭及糖用量对华南忍冬组培苗生根的影响。结果表明:0.02~0.03 mg·L-1的NAA可以有效诱导华南忍冬生根,加入0.2~0.3mg·L-1的活性炭可以促进根的生长,糖的用量可为15g·L-1。最适的生根培养条件为1/2MS+NAA0.03mg·L-1+活性炭0.3g·L-1+糖15g·L-1.炼苗试验——考察了开盖炼苗天数、季节以及几种生长基质对华南忍冬炼苗移栽成活率的影响,同时对传统方法及“一杯成苗”法进行比较。结果表明,炼苗开盖天数5~6天比较适宜,最适的炼苗基质比例为河沙:泥:珍珠岩=1:1:2;一杯成苗的方法可行,成活率高。3华南忍冬离体培养过程中绿原酸含量的动态变化考察了不同培养基得到的组培苗在不同生长时期绿原酸含量的动态变化,结果表明:其组培苗的绿原酸含量波动无规律变化。但不同培养基的配方组成对组培苗绿原酸的含量影响较大。