邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)是一种普遍存在的内分泌干扰性污染物,对人体健康造成损害,其快速检测势在必行。基于核酸适配体的检测方法因其速度快、特异性高而备受青睐。首先,以DEHP为研究对象,将单链DNA(ssDNA)文库固定于磁珠表面,构建固定文库的体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选方法。结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)监测技术,经多轮正负筛选获得识别DEHP的富集文库。进而,通过高通量测序技术、金纳米粒子(Au NPs)生物传感器和局域表面等离子体共振技术(LSPR)的系统组合策略,表征并确定高亲和力、高特异性核酸适配体。经过8轮筛选,文库的保留率为14%,高通量测序分析得到20000条序列。经Clustal X2和Treeview分析,挑选到129条同源率较高的序列。Au NPs生物传感器鉴定出4条有较高结合活性的核酸适配体。经LSPR分析,这4条核酸适配体aptamer 31、aptamer 123、aptamer 203、aptamer 281的亲和力分别为2.26±0.06 n M、5.33±0.01 n M、2.68±0.2 n M、43±0.7 n M。其中,核酸适配体aptamer 31亲和力最高。以核酸适配体aptamer31为研究对象,在其5’端修饰巯基,基于金-硫键作用将aptamer 31锚定在金电极表面,通过优化DEHP与aptamer 31孵育时间,构建电化学阻抗谱(EIS)生物传感检测方法,进而将该方法用于水样检测。结果表明,电极表面aptamer 31与DEHP最佳结合时间为30min。该方法的线性检测范围为7.629 pg/m L-2000000 pg/m L,最低检测限为0.103 pg/m L。核酸适配体aptamer 31与DEHP类似物之间不存在交叉反应,水样检测的平均回收率为76.07-141.32%。本研究建立的方法为电化学阻抗谱法应用于水样DEHP的监测奠定了良好的基础。