本研究从精子预处理和显微操作等方面研究影响孤雄生殖胚发育潜力的因素,旨在进一步优化、完善孤雄生殖技术,研究结果如下。1.比较一步法(去核直接注入精子)和两步法(卵母细胞去核后修整2小时,等透明带修复后再注入精子)两种显微操作方法对精子重构胚发育的影响,发现一步法的胚胎存活率显著高于二步法(分别为86.7%和51.7%),说明在牛孤雄生殖胚的生产过程中,一步法比二步法能明显提高重构胚成活率。2.比较三种精子处理方法对孤雄生殖胚的影响,发现DTT单独处理和DTT与断尾结合处理精子的方法都可以明显增加精子重构胚的卵裂率和囊胚率。这些结果表明,DTT预处理精子可以明显促进精核解聚和雄原核形成,对于精子重构胚的发育有极大的促进作用。3.比较三种浓度DTT对精子活率的影响,发现20mMol/L浓度处理活精子后,死精子率(25.5%)最高,而2mMol/L和5mMol/L处理活精子,对比于正常冷冻复苏的精子,死精子率也明显增加,但是两者之间差异并不显著。说明DTT对精子具有致死作用,随着浓度的升高作用越明显。4.应用电镜观察DTT对精子头部解聚的超微结构,发现随着DTT浓度的增加,精子头部发生明显膨胀,精子尾部开始弯折,说明DTT不仅作用于精子头部鱼精蛋白,使之减少达到精核去致密性的目的,同时也作用于精子尾部的质膜,使之薄弱而发生弯折。