【摘 要】
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目的:探究FOXO3a对miR-155调控机制及对肾透明细胞癌发生发展的影响。方法:我们收集了 30位病理确诊的肾透明细胞癌患者的肾癌组织及癌旁组织,通过RT-qPCR检测FOXO3a、miR-155-5p在肾癌及癌旁组织中的表达;预测FOXO3a在miR-155 host gene上的结合位点;构建FOXO3a过表达质粒、带荧光素酶的miR-155启动子报告基因质粒,并在786-0细胞中进行梯度
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目的:探究FOXO3a对miR-155调控机制及对肾透明细胞癌发生发展的影响。方法:我们收集了 30位病理确诊的肾透明细胞癌患者的肾癌组织及癌旁组织,通过RT-qPCR检测FOXO3a、miR-155-5p在肾癌及癌旁组织中的表达;预测FOXO3a在miR-155 host gene上的结合位点;构建FOXO3a过表达质粒、带荧光素酶的miR-155启动子报告基因质粒,并在786-0细胞中进行梯度共转染,转染24小时后进行荧光素酶报告基因实验;设计pre-miR-155、miR-155-3p、miR-155-5p相关引物并通过RT-qPCR检测FOXO3a转染后三者的表达变化;将786-0细胞分为对照组、FOXO3a过表达组、miR-155过表达组、FOXO3a过表达+回补组转染24小时后进行细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell实验。结果:1、在30例肾癌组织中,RT-qPCR检测提示FOXO3a在癌组织中低表达,且与TNM分期、淋巴转移密切相关（p<0.01）;2、miR-155-5p在肾癌组织中高表达;3、肾癌组织中FOXO3a与miR-155-5p的相对表达量呈线性负相关（p<0.01）;4、WB 提示 FOXO3a 在肾癌细胞（786-0、A498、Caki-1）中的表达均显著低于肾正常细胞（HEK-293、HEK-293T）;5、FOXO3a 在 miR-155 host gene上具有转录调控结合位点;6、WB验证FOXO3a过表达质粒构建成功;7、荧光素酶报告基因实验显示,随FOXO3a过表达的梯度增强,肾癌细胞的荧光值梯度下降（p<0.01）;8、过表达 FOXO3a 后 pre-miR-155、miR-155-3p、miR-155-5p的表达均明显下降（p<0.01）;9、将786-0细胞分四组转染后进行细胞功能实验,FOXO3a过表达后抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,与miR-155过表达质粒共转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力有所恢复。结论:FOXO3a在肾透明细胞癌组织和肾癌细胞中低表达,而miR-155在肾透明细胞癌组织和细胞中高表达,二者具有显著的线性负相关性;FOXO3a的表达与肾癌病人的TNM分期及淋巴转移等预后指标显著相关;FOXO3a与miR-155启动子靶向结合调控pre-miR-155的生物学合成;FOXO3a,通过调控miR-155影响肾透明细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
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