论文部分内容阅读
目的建立原发性开角型青光眼（Primary open angle glaucoma,POAG）小梁网细胞体外原代培养体系；分析不同浓度重组myocilin蛋白对POAG小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin，FN)表达及对细胞迁移、粘附功能的影响，探讨myocilin蛋白与原发性开角型青光眼发病的关系。方法运用组织块培养法，进行体外细胞原代和传代培养，取传3代的小梁网细胞分别加入含重组myocilin蛋白终浓度为0ug/m（l对照组）、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml的无血清培养基，继续培养24小时后，运用Westernblot、Elisa法分别检测小梁网细胞内以及细胞培养液中FN的表达水平；并运用Transwell小室法、CCK-8法检测myocilin蛋白对所培养传3代POAG小梁网细胞迁移、粘附的影响。结果1、组织块长出的细胞经倒置显微镜观察、免疫细胞化学抗原表达检测，证实体外培养细胞为POAG小梁网细胞；2、Western blot检测结果: FN/β-actin比值分别为33.4±1.0、28.9±0.8、21.6±0.9、15.9±1.1、11.9±0.8。0.5ug/ml组与对照组相比差异无统计学意义(P=0.09，P>0.05）；1.0ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml组与对照组的差异有统计学意义(P均为0.00，P<0.05)。3、Elisa法检测各组细胞培养液中FN浓度为：0.4654±0.0039ug/ml、0.4596±0.0032ug/ml、0.4216±0.0037ug/ml、0.4214±0.0039ug/ml、0.4043±0.0039ug/ml、0.3806±0.0071ug/ml。0.5ug/ml组与对照组相比差异无统计学意义(P=0.12，P>0.05）；1.0ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml组与对照组的差异有统计学意义(P均为0.00，P<0.05)。4、Transwell小室法检测结果显示：对照组和实验组细胞数分别为16.40±4.0373，8.60±2.0736，实验组细胞迁移数较对照组少，实验组与对照组的差异有统计学意义(P=0.005，P<0.05）。5、运用CCK-8法检测各组细胞吸光度值的均值分别为1.9814±0.1624、1.8848±0.0267、1.4895±0.0916、1.4120±0.1087、1.3392±0.1391、1.0310±0.0639。0.5ug/ml组与对照组相比，差异无统计学意义（P=0.30，P>0.05）；1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml组与对照组相比差异有统计学意义（P值均为：0.00，P<0.05）。结论1、myocilin蛋白能抑制POAG小梁网细胞纤维连接蛋白的表达，并呈现一定的剂量依耐性；2、myocilin蛋白可降低POAG小梁网细胞的迁移和粘附能力。