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本研究通过合成AFG1-BSA人工抗原,免疫Balb/c小鼠获得特异性抗血清,经过四次免疫后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG1450条件下融合,制备杂交瘤细胞,通过HAT半固体培养基筛选,获得一株阳性杂交瘤细胞株,对该细胞分泌的抗体进行特性鉴定,并应用该抗体建立了对AFG1的间接竞争ELISA检测方法,为黄曲霉毒素G免疫分析检测技术奠定基础。主要研究结果如下:(1)以AFG1为材料,通过还原烷基法打开AFG1双呋喃环双键实现与BSA偶联,通过紫外波长扫描显示,偶联物在422nm处出现了特征吸收峰,与半抗原以及载体蛋白的吸收峰相异,计算偶联比为3.2:1;对偶联物进行荧光分析结果显示,经过完全透析后,相同蛋白浓度的偶联物荧光强度比BSA高约6倍,数据表明成功合成AFG1-BSA人工抗原。对Balb/c小鼠进行免疫,经过四次免疫后抗血清效价达到1:128000,间接竞争ELISA检测其对AFG1的IC50值为14.7ng/mL,对AFG1具有特异性,并成功制备出抗AFG1的多克隆抗体。(2)免疫四次后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,融合的杂交瘤细胞通过HAT半固体培养基筛选,并转移至HT液体培养基中克隆化,得到一株细胞株,命名为2G6,对该细胞稳定性培养后冻存。对该细胞分泌的抗体进行特性鉴定,抗体亚型为IgG2a;通过间接竞争ELISA测定抗体对AFG1的IC50值为17.18ng/mL±3.5 ng/mL,和AFG2的交叉反应率为87%,对B族黄曲霉毒素的交叉反应率均低于5%,说明该单克隆抗体对黄曲霉毒素G具有特异性识别能力。(3)利用2G6单克隆抗体建立对AFG1的间接竞争ELISA检测方法。在本实验室建立ELISA检测技术科研基础上,本研究对包被原浓度、抗体浓度、封闭条件、甲醇浓度、稀释液和盐离子浓度六个方面进行优化结果为:包被原浓度2μg/mL,抗体浓度1:32000,封闭条件1%OVA溶液,20%甲醇浓度,PBST稀释液,0.14M盐离子溶液。经过条件优化,使得ELISA检测体系的灵敏度最高,IC50值最低为17.18ng/mL±3.5ng/mL,最低检出限为0.6018ng/mL±0.021ng/mL。(4)应用建立的ELISA检测体系对花生样品中AFG1进行检测。对花生样品添加不同浓度AFG1(5ng/mL、50ng/mL和200 ng/mL)标准品后粉碎提取,将提取液用PBS稀释5倍后测定,测得回收率分别为111.4%、94.18%和102.8%。试验数据表明,建立的间接竞争ELISA检测体系适用于对实际样品进行快速、高灵敏度的检测。