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胃黏膜肠上皮化生(IM)是胃癌的癌前病变，与肠型胃癌密切相关。在从胃炎到肠化乃至肠型胃癌的发病过程中，出现了一系列细胞表型的变化，主要是由于相关转录因子及其所调控基因的表达变化所致。肠转录因子Cdx2的过度表达在IM的发生、发展过程中起着至关重要的作用。Cdx2是肠化生的重要调节因子，甚至可能是始动因子；并可能通过对肠化生的另一重要标志物肝肠钙粘连蛋白(LI-CD)的调节来传递由胃向肠表型转化的信号。实验目的：探讨在不同胃黏膜IM病理情况下Cdx2、Sox2及LI-CD的表达变化；Cdx2与LI-CD及Sox2是否存在表达相关性。转染Cdx2基因，体外构建Cdx2基因过表达胃上皮肠化模型，研究Cdx2过表达是否可以导致胃上皮向肠上皮表型的转变及其对LI-CD的表达是否具有调控作用。方法：1．Real-time PCR方法检测病理学诊断为胃炎、轻度IM、中-重度IM组各12例胃镜活检标本中Sox2、Cdx2和LI-CD基因的转录水平。使用免疫组化方法检测80例病理学诊断为胃炎、轻、中、重度肠化的石蜡包埋胃黏膜标本中Cdx2和LI-CD蛋白的表达情况。2．构建含野生型人Cdx2基因读码框的重组真核表达载体pcDNA3．1／wtCdx2，转染体外培养的人胃上皮细胞系GES-1。经Western Blot(WB)证实外源Cdx2基因的表达后，检测被转染细胞中Sox2和villin的表达情况。3．以点突变的方法构建Cdx2 DNA结合结构域(DNA binding domain)编码区突变型重组质粒pcDNA3．1／mutCdx2，转染人胃上皮细胞系GES-1，WB方法检测Cdx2、Sox2和villin的表达情况。结果：1．临床活检标本的Real-time PCR结果显示：Cdx2，Sox2，LI-CD基因cDNA的水平在慢炎组、轻度肠化组、中-重度肠化各组之间两两比较均存在统计学差异(P＜0．05)。随着肠化程度加重，Cdx2和LI-CD的表达逐渐增高，而Sox2的表达则明显下调。Cdx2和LI-CD cDNA在各组中的表达呈正相关，并以在轻度肠化组的相关性最高(r=0．910，P＜0．01)。2．临床活检标本的免疫组化结果显示：Cdx2和LI-CD在胃炎组、轻、中、重??度IM组的表达阳性率及表达水平逐渐增高，各组间均有显著性差异(P＜0．001)。Cdx2和LI-CD在各组间的总相关系数r=0．827(P＜0．01)，呈显著正相关。3．较空pcDNA3．1质粒转染的对照组相比，在不同剂量pcDNA3．1／wtCdx2质粒转染的人胃黏膜上皮细胞中以Western Blot证实Cdx2和villin的表达成正相关；Sox2的表达则与Cdx2负相关。在pcDNA3．1／mutCdx2质粒转染的细胞系中，仅可检测到突变型Cdx2蛋白的表达，villin及Sox2的表达均与对照组无明显区别。结论：1．在人胃黏膜肠化组织中，随着肠化的进展，出现Cdx2和LI-CD的异位表达及Sox2的下调；在肠化组织中Cdx2和LI-CD具有显著正相关性，提示两者可能处于同一信号调节通路中。同时从转录水平证实了在肠化生组织中Sox2和Cdx2的表达负相关。2．体外细胞试验证实了野生型Cdx2基因可以上调villin的表达和下调Sox2的表达，使细胞向肠化生表型转化，而突变型Cdx2基因则无此功能。证实了Cdx2在肠化生中的重要作用，证明Cdx2在肠化的信号通路中至少有一条路径处于Sox2的上游。3．以野生型Cdx2基因过表达的方式，成功建立了胃上皮体外肠化模型。