论文部分内容阅读
目的:阐明毛酸浆内酯B通过抑制人胃癌细胞JAK2/STAT3信号通路,进而下调STAT3靶基因如XIAP和C-myc等的表达,抑制胃癌细胞增殖及诱导凋亡的机制,为进一步将毛酸浆内酯B发展成为新型JAK2或STAT3抑制剂提供基础。方法:1.CCK8法检测不同浓度毛酸浆内酯B分别作用人胃癌MGC803和SGC7901细胞24h和48h后的细胞存活率;2.不同浓度毛酸浆内酯B处理人胃癌MGC803和SGC790]细胞24h后,流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9和PARP的活化情况;3.Western blot检测毛酸浆内酯B对人胃癌MGC803和SGC7901细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白磷酸化水平的影响;4.Western blot检测毛酸浆内酯B对IL-6诱导的STAT3磷酸化水平的抑制作用;5.毛酸浆内酯B处理MGC803细胞4h,免疫荧光检测p-STAT3(Tyr705)的核移位情况;6.双荧光素酶报告基因法检测毛酸浆内酯B对STAT3转录活性的影响;7.RT-PCR和Western blot检测毛酸浆内酯B对STAT3下游靶基因XIAP、CyclinD 1和C-myc等转录及翻译水平的影响;8.建立MGC803移植瘤裸鼠模型,研究毛酸浆内酯B的体内抑瘤作用。结果:1.CCK8检测结果显示,毛酸浆内酯B可明显抑制MGC803和SGC7901细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性,且15μM毛酸浆内酯B作用MGC803和SGC7901细胞24h,存活率分别为49.80±5.68%,56.76±3.78%,近半数抑制率。2.流式检测结果显示,毛酸浆内酯B呈浓度依赖性诱导MGC803和SGC7901细胞的凋亡,且15μM毛酸浆内酯B作用MGC803和SGC7901细胞24h后,凋亡率分别为44.2±13.29%和48.13±10.38%。同时Westernblott结果显示,毛酸浆内酯B呈浓度依赖性引起凋亡标志蛋白caspase3、caspase9、PARP的剪切活化。3.WesternBlot结果显示,毛酸浆内酯B可明显抑制MGC803和SGC7901细胞JAK2、STAT3的磷酸化水平,抑制程度呈浓度和时间依赖性。4.Western Blot结果显示,毛酸浆内酯B明显抑制IL-6诱导的STAT3磷酸化水平的升高。5.免疫荧光结果显示,15μM的毛酸浆内酯B作用8h后,p-STAT3(Tyr705)入核显著减少。6.双荧光素酶报告基因检测显示,毛酸浆内酯B呈浓度依赖性抑制STAT3的转录活性。7.Western Blot结果显示,毛酸浆内酯B抑制了 STAT3下游靶基因XIAP、CyclinD1和C-myc的转录及翻译水平。8.移植瘤裸鼠模型结果显示,60mg/kg的毛酸浆内酯B可明显抑制MGC803细胞移植瘤的生长,且抑瘤率为47.11±12.85%。结论:毛酸浆内酯B通过抑制JAK2/STAT3信号通路,下调下游相关靶基因XJAP、CyclinDl和C-myc的表达,从而显著诱导人胃癌细胞的凋亡,同时,体内抗肿瘤效果明显,且安全有效,因此毛酸浆内酯B有望进一步开发成为新型JAK2或STAT3抑制剂,为临床治疗提供新方法。