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榛子雄花为桦木科植物榛的干燥雄花。广泛分布于东北、华北及陕西、甘肃等地。果实和花均可入药,其中榛子雄花具有消炎、消肿、止痛等作用。可用于皮肤炎症和冻伤,外用治疗各种化脓性感染等。榛子雄花中主要含有黄酮类、二苯基庚烷类、甾类等化学成分。据报道,这些化合物具有多种生物活性,如抗癌、抗病毒、抗氧化、抗菌等。榛子雄花在民间也用于肝硬化腹水的治疗。本实验对榛子雄花的化学成分和肝保护活性进行了研究,旨在为榛子雄花的进一步开发利用提供依据。在此次实验中,将干燥的榛子雄花用甲醇溶液浸泡过夜,回流提取3次,合并提取液,浓缩,然后将得到的提取物用适量的蒸馏水溶解制成混悬液,用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取3次,浓缩得到各层萃取物,运用物理化学方法,如重结晶,硅胶柱层析,反相硅胶柱层析,中压制备色谱等,对石油醚、乙酸乙酯、正丁醇层萃取物进行进一步的分离纯化,最终分离得到30个单体化合物。根据物理化学性质及综合运用谱图数据及与标准品对照最终解析出化合物的结构,它们分别为:β-谷甾醇(1),β-胡萝卜苷(2),7,22-二烯-3-β-麦角甾醇(3),7,22-二烯-3,5-二-β-麦角甾醇(4),7,22-二烯-3-麦角甾醇-β-D-葡萄糖苷(5),对羟基苯甲酸(6),3,4二羟基苯甲酸(7),1,2,4苯三醇(8),2-羟基-4-十一烷基-苯甲醛(9),没食子酸甲酯-3-O-β-D-葡萄糖苷(10),2-(3,4-dihydroxyphenyl)-ethy1-β-D-glucopyranoside(11),alusenone 1a(12),alusenone 1b(13),hirsutanone(14),hirsutanonol(15),oregonin(16),5(S)-hirsutanonol-5-O-β-D-glucopyranoside(17),1,7-bis(4-hydroxyphenyl)-5-(β-D-xylopyranosyloxy)-(5S)-3-heptanone(18),alnusideA(19),alnuside B(20),carpinontriol B(21),corylusideA(22),山奈酚(23),山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(24),山奈酚-3-O-α-L-(4"-E-对香豆酰基)-鼠李糖苷(25),山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(26),槲皮素(27),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(28),槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(29),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-(1-6)-β-D-半乳糖苷(30)。其中,化合物22为新化合物,化合物4,5,8,9,10,11,16,17,18,19,20,30为首次从榛属植物中分离得到。由于本实验未对榛子雄花石油醚层的低极性挥发性成分进行分离,我们采用气流吹扫微注射器萃取(GP-MSE)获得榛花的挥发性成分。气相色谱-质谱联用(GC-MS)对所得的榛花的挥发性成分进行分析,并采用归一化法测定其化学成分的相对含量,对这一部分进行了补充实验。在榛花的挥发性成分中检测出130个峰,并鉴定出其中的亚油酸甲酯(11.49%)、十六烷酸(10.92%)、9,12-十八碳二烯酸(9.75%)和9,12,15-十八碳三烯酸乙酯(8.80%)十六烷酸甲酯(7.37%),正四十烷(6.02%)等70个化合物。首先,为了初步确定榛子雄花提取物的药理活性,我们采用了 DPPH法测定了提取物抗氧化活性,可以看出榛子雄花总提取物以及石油醚、乙酸乙酯、正丁醇层萃取物均表现出良好的抗氧化活性,乙酸乙酯层萃取物的抗氧化活性比阳性组维生素C的效果更好。因此我继续对榛子雄花提取物、萃取物、以及分离得到的单体化合物的体内和体外活性进行了研究。在体外活性实验中,以人肝癌细胞系HepG2细胞系作为模型评价榛子雄花甲醇提取物及各层萃取物和从榛子雄花中分离出来的30个化合物的肝保护活性作用。将分离出的30个化合物分别配制成终浓度为(80μM、40μM、20μM、10μM)等不同的浓度,以姜黄素(Curcumin)作为阳性对照药对照,利用他克林诱导肝细胞毒性,通过MTT法测试细胞增殖率,结果发现榛子雄花甲醇提取物以及石油醚、乙酸乙酯层萃取物和化合物16,17,19,20,21,23,24,27具有一定的肝保护活性。其中化合物19,20的EC50值小于阳性对照药姜黄素的EC50值,肝保护效果显著。在体内活性试验中,选用昆明小鼠,榛子雄花提取物对小鼠进行灌胃,7天后采用CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型,对小鼠血清及肝匀浆中的AST、ALT、SOD、GSH、MDA指标进行了测定,并对小鼠肝脏进行了组织切片和H-E染色,可以看出榛子雄花对CCl4诱导肝损伤模型有明显的保护作用。