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TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体)是1995年发现的TNF(tumor necrosis factor)超家族的新成员,它能够特异地诱导多数肿瘤细胞凋亡,而对大多数正常细胞没有毒性。因此,TRAIL及其功能性受体DR4或者DR5的单克隆抗体成为非常有前景的肿瘤治疗的候选药物,备受人们的关注。其中,单克隆抗体由于其靶点的特异性,可更好地应用于肿瘤个体治疗以及细胞内信号机制研究。本课题组前期工作通过采用DR5的胞外区免疫小鼠,筛选得到鼠源单克隆抗体AD5-10,它在体内体外都具有很强的生物学活性,且AD5-10引起肿瘤细胞的死亡可能通过caspase依赖和非依赖两种方式进行。本研究拟进一步探讨AD5-10引起细胞死亡的分子机制。我们发现AD5-10引起Jurkart细胞内ROS(reactive oxidated spiecies)明显聚集以及相应的还原物质GSH降低,而TRAIL处理后氧化还原水平没有发生明显变化;抗氧化剂如NAC(N-acetylcysteine)或者GSH(glutathione)通过清除细胞内ROS聚集,可以浓度梯度依赖性地抑制AD5-10诱导的Jurkart和HCT116细胞死亡;发现NAC抑制AD5-10诱导的细胞死亡是通过有效抑制AD5-10引起的Jurkart细胞内线粒体膜电位的下降和心磷脂的过氧化,进而抑制线粒体核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)的释放及其核内转位,而NAC对于TRAIL引起的细胞死亡没有任何作用;AD5-10能够诱导Jurkar细胞早期的JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38磷酸化,以及JNK的二次(secondary)磷酸化,而TRAIL仅能诱导早期的JNK和P38激活,但是没有JNK的二次激活;发现还原物质NAC能够完全消除AD5-10诱导的JNK的二次磷酸化,但对于早期短暂的JNK和P38激活没有任何抑制作用,NAC对于TRAIL引起的早期JNK激活也没有任何抑制作用。为了进一步研究MAPK激酶JNK在AD5-10诱导的细胞死亡中的作用,我们将野生型Jurkar细胞稳定转染JNK显性负或者P38显性负的质粒,分别筛选得到稳定细胞株MP4和MJ2,我们发现与野生型Jurkar细胞相比,MP4和MJ2能明显抑制AD5-10诱导的细胞死亡,但无论是野生型Jurkat或MP4、MJ2细胞对TRAIL诱导的细胞死亡均无显著影响;同时还发现JNK显性负细胞经AD5-10处理后,DISC募集Caspase-8的能力和细胞内线粒体脂蛋白的氧化压力降低,细胞内IκB的基础磷酸化水平提高,细胞的存活能力提高。本研究阐述了AD5-10诱导Jurkat细胞死亡的分子机制和信号途径,获得了一系列前人尚未报道的资料,对于进一步研究DR5介导的细胞死亡调控和AD5-10用于肿瘤治疗具有重要理论和实际意义。