常山酮(Halofuginone)是从植物常山中分离出来的喹唑酮类生物碱,该药抗球虫谱广,对球虫的子孢子、第一代裂殖体和第二代裂殖体均有明显的抑杀作用,因此被用作饲料添加剂用于家禽球虫病的防治。常山酮除具有抗球虫作用外,还可以抑制胶原蛋白合成、抑制肿瘤细胞活性。目前现行的用于检测动物性食品中常山酮残留量的国家标准存在较大的局限性,仅适用于鸡的肌肉和肝脏两种组织,且该方法的灵敏度不高。因此,亟需建立一种灵敏、快速、简便、便于推广且适用于多种动物组织(牛、鸡、猪三种动物的肌肉、肝脏、肾脏、皮脂组织)中常山酮残留量检测的高效液相色谱法作为新的国家标准,以保障动物性食品安全,促进外贸出口发展。根据全国兽药残留专家委员会办公室提出的《2016年农业行业标准制定和修订(农产品质量安全)项目指南》文件,本着试验方法学灵敏度不低于原标准或尽可能低、动物组织尽可能全的要求,本课题承担了农业行业标准制定和修订(农产品质量安全)项目中《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》制定工作,在原试验方法的基础上优化了方法学条件,建立了一种更为快速、简便、便于推广的检测方法,可以满足动物性食品中常山酮残留量的检测需求。本研究在查阅了国内外大量文献的基础上,对样品前处理方法、液相色谱条件进行了反复摸索和优化,最终建立了动物组织中常山酮残留量检测的高效液相色谱法。该标准参考了其他行业部门制定的类似标准方法,本着准确、实用、快速、与国际水平接轨的原则,严格遵循科学依据,最终完成了标准检测方法的建立,并在安徽省兽药饲料监察所、江苏省畜产品质量检验测试中心、河南省兽药饲料监察所3家检验机构进行方法学验证,最后起草了标准的送审稿和编制说明。1动物组织中常山酮残留量的测定本研究旨在建立牛、鸡、猪的肌肉、皮脂、肾脏、肝脏组织中常山酮残留量测定的高效液相色谱法。组织样品在碱性环境中用乙酸乙酯提取,得到的提取液再用0.125 mol·L-1乙酸铵缓冲液进行液液萃取,取下层水相,重复萃取一次,合并两次水相,氮气吹干残余乙酸乙酯。剩余液体用HLB柱净化,洗脱,洗脱液经氮气吹干后用流动相复溶,滤膜过滤后用高效液相色谱法测定。流动相为乙腈-0.006 25 mol·L-1乙酸铵缓冲液(25+75,用乙酸调节pH至4.3),检测波长为243 nm。结果显示,该方法下的检测限为8 μg·kg-1,定量限为10 μg·kg-1。本方法在10 μg·kg-1～400 μg.kg-1浓度范围内回收率为70.68%～110.91%,日内相对标准偏差≤20.62%,日间相对标准偏差 ≤16.07%。研究结果表明,该方法具有良好的线性关系、精密度和回收率,可以快速、准确、灵敏的检测动物组织中常山酮的含量。2《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》方法的复核验证在制定《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》方法的同时,为达到国家标准的要求,在编制的过程中,在开展并完成了标准检测方法的制定后,在安徽省兽药饲料监察所、江苏省畜产品质量检验测试中心、河南省兽药饲料监察所3家检验机构进行方法学复核验证,从而确保该试验方法的准确可靠。验证试验重复了第二章的试验方法。方法的专属性、检测限为8 μg·kg-1、定量限为10 μg·kg-1均可以得到验证,在安徽省兽药饲料监察所验证试验得到在10 μg·kg-1～400 μg·kg-1添加浓度水平上回收率为62.1%～116.0%,本方法的日内相对标准偏差≤19.7%,日间相对标准偏差≤16.97%;在江苏省畜产品质量检验测试中心验证试验得到在10μg·kg-1～400μg·kg-1添加浓度水平上回收率为68.5%～118.1%,本方法的日内相对标准偏差≤19.35%,日间相对标准偏差≤14.76%;在河南省兽药饲料监察所验证试验得到在10 μg·kg-1～400 μg.kg-1添加浓度水平上回收率为76.9%～118.6%,本方法的日内相对标准偏差≤12.44%,日间相对标准偏差≤10.70%。试验结果表明《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》方法准确可靠,具有良好的重复性。3《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》标准文本制定本试验在实验室标准检测方法制定的基础上,通过安徽省兽药饲料监察所、江苏省畜产品质量检验测试中心、河南省兽药饲料监察所3家检验机构进行方法学复核验证,形成《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》的标准文本意见稿,之后经由二十多位该领域专家的意见指导形成《动物性食品中常山酮残留量的测定高效液相色谱法》的标准文本送审稿。该标准文稿规定了动物性食品中常山酮残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。并适用于鸡、猪、牛的肌肉、皮脂、肾脏、肝脏组织中常山酮含量的测定,方法具有灵敏度高、适用范围广、快速准确、可重复性好等优点,能够对动物源性食品中常山酮的药物残留进行有效监控,从而保证动物源食品的安全。