YBO3:Tb荧光分子探针的制备及其在生物分析中的应用

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稀土荧光分子探针因其优异和独特的光学性能,如Stokes位移大,荧光发射强度强,半峰宽窄、荧光寿命长、物理化学性质稳定等,在免疫分析、DNA检测及细胞成像研究中有着很好的应用前景。利用荧光共振能量转移技术进行生物分子的检测,该方法具有所需仪器设备简单、灵敏度高、特异性强等特点。因而,将稀土荧光分子探针应用于共振能量转移技术对生物大分子进行测定,此项工作正引起越来越多研究人员的关注。基于纳米材料的表面修饰技术,通过水热法制备了柠檬酸钠包覆的YB03:Tb纳米粒子。考查了实验条件对合成粒子荧光性能的影响,确定了最佳合成条件为:初始反应物浓度为0.1mol/L,稀土离子总量与硼酸的摩尔比为1:1,Tb3+掺杂比例为20%,稀土与硼酸混合溶液pH值为10.0,加入0.01mol/L柠檬酸钠的体积为5ml,所占体积分数为0.36,反应温度为160℃,反应时间为6h。合成YB03:Tb纳米粒子溶液荧光强度大且光学性能稳定,测定粒子的荧光寿命为1.53ms,最大激发和发射波长分别位于234nm和545nm。对合成的YB03:Tb纳米粒子进行了表征。红外光谱实验表明,合成粒子表面包覆了柠檬酸根,TEM测试表明合成粒子粒径在30nm左右,粒子之间存在一定的团聚。XRD实验说明在160℃的温度下合成了非晶态的YB03:Tb纳米粒子。以溶菌酶分子为桥,建立了YB03:Tb粒子与纳米金之间的共振能量转移体系,对体系的反应条件进行了优化。在pH值为7.4的硼酸缓冲溶液中,加入5×10-3mol/L的YB03:Tb粒子200μL,纳米金400μL,当溶菌酶浓度在0-33μg/ml时,粒子的荧光强度和溶菌酶的浓度之间存在较好的线性关系。以偶联兔抗羊IgG的YB03:Tb纳米粒子为能量供体、偶联人IgG的纳米金为能量受体,以羊抗人IgG为桥,建立了“夹心法”检测羊抗人IgG抗体的模型。实验结果表明,当羊抗人IgG的浓度在1.6~60μg/mL范围内时,体系的荧光强度与羊抗人IgG的浓度符合线性关系,线性回归方程I=783-3.11c,相关系数R=0.9910。对浓度为2.0μg/mL的羊抗人IgG溶液平行测定11次,得到检出限为1.0μg/mL,检测灵敏度较高。
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