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我国是奶牛养殖大国,奶牛胎盘来源广、质量大,其提取的多肽(Cow placenta extract,CPE)具有抗氧化、调节免疫和促毛发生长等作用。然而,牧场的奶牛胎盘常视为废弃物而丢弃,造成资源浪费的同时也易污染环境。因此,本研究通过多种抗氧化活性检测方法探究CPE体外抗氧化活性,并通过D-gal诱导的小鼠衰老模型,探究CPE体内抗氧化活性和延缓皮肤衰老作用,为奶牛胎盘的回收利用提供理论基础。1.奶牛胎盘多肽体外抗氧化活性研究。试验选取自然分娩的健康中国荷斯坦奶牛胎盘,制备胎盘组织匀浆后加入木瓜蛋白酶,调节PH为6.5,底物浓度为34.03%,酶底比为3.66%,温度55℃,反应4.7h后,90℃灭活10min,6000r/min离心5min,收集上清,冻干24h,制得CPE;分别采用ABTS法、FRAP法和Ferrozine法检测CPE自由基清除力、还原力和金属螯合力。结果显示,ABTS自由基清除力的TEAC为19.56μmol/g,还原力为43.62μmol/g,50mg/ml CPE的Ferrozine抑制率为72.60%,表明,CPE有较强自由基清除力、还原力和金属螯合力,且与其浓度呈正相关,体外抗氧化活性良好。2.奶牛胎盘多肽体内抗氧化活性及延缓皮肤衰老作用。试验选取40只体重19.31±1.18g的8周龄清洁级雄性昆明小鼠,随机分为空白对照组(N组)、模型组(M组)、治疗组(T组)和阳性药物对照组(P组),n=10。M组、T组和P组分别腹腔注射D-gal(500mg/kg/d,BW),N组腹腔注射等量生理盐水;T组和P组分别灌胃CPE(2000 mg/kg/d,BW)和维生素C(100mg/kg/d,BW),N组和M组均灌胃等量蒸馏水。每周称重1次以调整注射剂量,持续处理8周;处理结束后3天,小鼠摘除眼球收集血清并断颈处死,剃除背部毛发,采集1cm×1cm皮肤组织备用;皮肤组织经4%多聚甲醛固定,进行HE和Masson染色,分别测定表皮和真皮厚度、胶原蛋白含量,并分别观察皮肤组织和胶原纤维病理变化;剪取1g皮肤组织,加入9ml PBS,于玻璃匀浆器中匀浆充分后,3000r/min离心20min,收集上清,得皮肤组织提取液;q-PCR检测提取液中MMP-1a、MMP-3、TIMP-1和TGF-β基因表达水平;ELISA法检测血清CAT、POD、GSH、GSH-Px、SOD、MDA和T-AOC含量及提取液MMP-1a、MMP-3、TIMP-1和TGF-β水平。结果显示,(1)体重增长速率T组明显高于其余3组,M组明显低于其余三组,最终体重M组显著低于N组和T组(P<0.05);(2)M组表皮结构损伤、毛囊稀少、胶原纤维稀疏,真皮厚度和胶原纤维含量均显著低于N组和T组(P<0.05);(3)M组CAT、GSH-Px、POD、SOD等抗氧化酶及GSH、T-AOC水平极显著低于其余三组(P<0.01),MDA极显著高于其余三组(P<0.01);(4)M组较N组MMP-1a和MMP-3基因表达量和含量均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,TGF-β基因表达量和TIMP-1含量分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)下降,T组较M组MMP-1a和MMP-3基因表达量和含量均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,TIMP-1表达量和含量均显著升高(P<0.05),TGF-β表达量极显著升高(P<0.01)。表明,CPE可增加小鼠体重,减轻胶原结构损伤,提高真皮厚度和胶原纤维含量,提高小鼠血清CAT、GSH-Px、POD和SOD含量,增强T-AOC和GSH水平,降低MDA含量,同时上调TGF-β和TIMP-1基-因表达,增加其含量,促进胶原蛋白生成;下调MMP-1和MMP-3基因表达,降低其含量,减少胶原蛋白降解。结论:CPE有较强自由基清除力、还原力和金属螯合力,可提高T-AOC和GSH含量,增加CAT、GSH-Px、POD和SOD等抗氧化酶含量,降低MDA水平,体内外均具有良好抗氧化活性;可通过增加胶原蛋白合成,减少其降解,减轻由D-gal导致的皮肤胶原蛋白损伤,延缓皮肤衰老。